SN_T 3729.4-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第4部分：芒果成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.4--2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第4部分：芒果成分检测实时荧光PCR法Identification of fruit species in export food and drink-Part 4 : Detection of mango ingredient---Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国D发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3729.4—2013前言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为以下10个部分：第1部分：草莓成分检测PCR法；第2部分：杏成分检测实时荧光PCR法；第3部分：梨成分检测实时荧光PCR法；第4部分.芒果成分检测实时荧光PCR法；第5部分：木瓜成分检测实时荧光PCR法；一第6部分：苹果成分检测实时荧光PCR法；第7部分：葡萄成分检测PCR法;第8部分：山楂成分检测实时荧光PCR法；第9部分：桃成分检测实时荧光PCR法；第10部分：香蕉成分检测　实时荧光PCR法。本部分为SN/T3729的第4部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局。本部分主要起草人：刘彩霞、高宏伟、孙敏、林超、甘琴华、陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、邓婷婷1 SN/T 3729.4—2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第4部分：芒果成分检测实时荧光PCR法范围1SN/T3729的本部分规定了出口食品和饮料中芒果成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以水果为原辅料的食品中芒果成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。n规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求实验室质量控制规范‘食品分子生物学检测GB/T 274033术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1芒果mango别称庵罗果、檬果、密望子、香盖，属漆树科（Anacardiaceai果属3.2清汁clarified juice经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果汁。3.3浊汁 cloudy juice未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。4缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonuleoside triphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)1 SN/T 3729.42013dATP：脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate）dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate)dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)Taq:水生栖热菌（Thermus aquaticu）FAM:羧基荧光素（carboxyfluorescein)TAMRA：羧基四甲基罗丹明（carboxy-tetramethyl-rhodamine)UNG酶：尿嘧啶-N-糖基化酶（uracil-N-glycosylase）OD:光密度值(optical density)5　方法提要提取DNA，以DNA为模版，分别采用芒果的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增.观察实时荧光PCR的增幅现象，进行食品及饮料中芒果成分的检测鉴定·其以芒果果肉DNA为阳性对照，以非芒果来源的DNA为阴性对照,无菌水作为空白对照。6试剂和材料除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂。条件许可的情况下推荐使用优级纯试剂。试剂的选购、验收，贮存应符合GB/T27025的规定。实验用水