SN_T 3466-2013出口食品平板菌落计数 滤膜法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3466—2013代替 SN/T1059.3—2002出口食品平板菌落计数滤膜法Plate count for bacterial colonies in food for export--Membrane filter method2013-03-01发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局套真 SN/T 3466—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1059.3--2002《进出口食品平板菌落计数滤膜法》。本标准与SN/T1059.3-2002相比，除编辑性修改外，主要技术性变化如下：将标准名称修改为“出口食品平板菌落计数滤膜法”。将范围修改为：“本标准适用于矿泉水、纯净水、单晶糖、饮料、牛奶、葡萄酒及保健饮品中菌落计数的检验。”一将“2引用标准”修改为“2规范性引用文件”,并对其下文进行了修改。去掉原标准“3抽样”内容。-增加了3.13pH计或pH比色管或精密 pH试纸。增加 5.2检测程序。对菌落计数的计算方法及结果与报告进行了修改。将原标准“附录A（标准的附录)”修订为“附录A（规范性附录)”,并对其内容进行文字和格式的修改。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵良娟、刘培、曲鹏、赵宏、侯丽萍、张宏伟、张霞、张海滨、高旗利。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 0159. 3---2002. SN/T 3466—2013出口食品平板菌落计数滤膜法1范围本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。本标准适用于出口矿泉水、纯净水、单晶糖、饮料、葡萄酒、牛奶等食品及保健饮品中菌落计数的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN0330出口食品中微生物检验通则3设备和材料3.1滤器：一套,备有预滤器。3.2真空泵。3.3滤膜：有机或水相,孔径为0.45μms3.4恒温培养箱：36℃±1℃。3.5恒温水浴箱：35℃±1℃。3.6吸管：1mL(具0.01ml.刻變）、10mlL(具/o.1ml,刻度)或微量移液器及吸头。3.7玻璃三角瓶和广口瓶：200ml.500mL。3.8 试管:17 mmX170 mm,玻璃制。3.9玻璃珠：直径5mm。3. 10平Ⅲ:直径90 mm。3. 11天平：量程2kg，感量0.1g3. 12均质器。3.13pH计或pH比色管或精密pH试纸。4培养基和试剂4.1至蛋白陈-吐温80(PT)稀释液：见附录 A中A.1。4.2胰化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA):见附录 A 中 A.2。4.33三(羟甲基)胺甲烷 Tris 缓冲剂:见附录 A中 A.3。4.4胰蛋白酶贮存液：见附录 A中 A.4。5检验方法5.1方法提要一定数量的样液通过滤膜时，细菌被截留在滤膜表面，将滤膜置于胰化大豆坚牢绿琼脂（TSFA)培1 SN/T 3466—2013养基上培养后，可产生深、浅绿色菌落，对菌落进行计数，从而测得样品中的菌落总数。5.2检验程序滤膜法的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mLPT稀释液，均质10倍系列稀释液的制备选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，分别取10mL抽吸过滤1滤膜置于TSFA琼脂平板表面，36℃±1°℃培养48 h菌落计数报告图1i滤膜法的检验程序6检测步骤6.1样品的稀释6.1.1固体或半固体食品，以无菌操作称取25g样品，放人装有225mLPT稀释液的灭菌均质杯内。8000r/min均质1min～2min，或放人装有225mLPT稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1：10 的样品匀液。6.1.2液体食品，以灭菌吸管吸取25 mL样品，放人装有225 ml.PT稀释液的500 mL灭菌广口瓶中，迅速振摇，充分混匀，制成1：10的样品匀液。吸取样品时，吸管插人液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2 s～4 s 内完全排人稀释液中,不要在稀释液中吹洗吸管。6.1.3用10mL灭菌吸管或微量移液器准确吸取1：10的样品匀液10mL，缓慢注人装有90mlPT稀释液的灭菌广口瓶中，迅速振摇，充分混匀，制成1：100的样品匀液。6.1.4分别用10mL灭菌吸管按6.1.3所述操作程序将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品液,如10-3、10-4、10-5,6.1.5需要酶处理的样品,取需要酶处理的牛奶样品1：10 PT样品匀液10