YY_T 1620-2018心肺转流系统 连续流血泵红细胞损伤评价方法.pdf

ICS_11.040.40C 45YY中华人民共和国医药行业标准YY/T1620—2018心肺转流系统连续流血泵红细胞损伤评价方法Cardiopulmonary bypass systems—Assessment method of red blood cell damage incontinuous flow blood pumps2018-09-28发布2019-10-01实施国家药品监督管理局发布 YY/T 1620—2018目次前言引言II范围规范性引用文件3术语和定义通则5试验概速6试险前准备试验步骤接受准则附录A（规范性附录）体外评价血系红细感损伤试验所用血液的选择附录B（资料性附录）血浆游高血红蛋白和总血红蛋白的测定方法参考文献 YY/T 1620—2018及17.3mg的腺嘌呤。溶液的pH值可用氢氧化钠演定，A.3.3500mL血液中含有2000单位~3000单位肝素抗凝剂， YY/T 1620—2018附录B（资料性附录）血浆游离血红蛋白和总血红蛋白的测定方法B.1原理本方法的原理是除硫化血红蛋白外，血红蛋白及其衔生物在碱性条件下可被高铁氯化钾氧化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰化钾反应生成氰化高铁血红蛋白，采用微孔板分光光度计(酶标仪)在540nm波长处读数测定氰化高铁血红蛋白吸光度值。B.2试剂、耗材及设备B.2.1试剂CMH试剂、氰化高铁血红蛋白标准晶。B.2.2耗材96孔板、试管、枪头。B.2.3设备微孔板分光光度计（酶标仪）、高心机、加样器，B.3校准标准品、质控品及血液样品的制备B,3.1校准标准品的制备以氛化高铁血红蛋白标准品作为贮备液，然后采用血红蛋白氧化剂(CMH试剂)作为介质，进行1：2借稀释得到系列校准标准品，标准曲线的吸光度值应包括样品的吸光度值（见表B.1)，表 B.1校准标准品的制备标准品披度制备方法mg/mL校准10.82 mL忙备液校准20.41 mL 校准 1+1 mL CMH 试剂校准 30.21 mL 校准 2+1 mL CMH 试剂校准40.11 mL校准3+1 mL CMH试剂校准 50.051 mL 校准4+1 mL CMH 试剂校准 6Szo01 mL 校准 5+1 mL CMH 试剂B,3.2质控品的配制参见校准标准品，包括高、中、低3个浓度，这三个浓度应在校准标准品范围内，且与校准标准品的 YY/T 1620—2018系列浓度不重复（见表B.2)，表 B,2质控品的制备质控品浓度mg/mL制各方法质控10.6251,5 mL贴各原液+0.42 mL CMH试质控20.125200 μL质控1+800 μL CMH试剂质控30.062 5100 μL 质控 1 +900 μL CMH 试剂EEH血液样品的制备取循环前血液2mL于试管中备用，取各个时间点的血液1mL于试管中，800g高心15min，收集上清液(血浆)，放置备用。B,4血液样本合格判定一血液样本中血浆游离血红蛋白(PFH)和总血红蛋白(TBH)的测定B,4,1向96孔板每孔加人200μL空白CMH试剂、校准标准晶、质控品。B,4,2共6孔。B,4.3PFH样本加样；向每孔加人B.3.3中制备的100μL血浆，共6孔，再加人100μLCMH试剂，B,4,4将96孔板密封后，置于平板报荡器上轻轻振需1min～2min（中速，可设定为2档～3档，如250次/min)。B,4.5于540nm被长处读取各孔吸光度值，然后根据标准曲线回归方程[见式(B,1)]计算得到PFH和TBH的浓度。PFH样本的最终浓度要乘以帮释因子2；TBH样本的最终浓度要乘以稻释因子251。若PFH浓度低于1mg/mL，血液样本合格，可继续下一步试验；若高于1mg/mL，则当前血液样本不适合本试验，需重新采血，B.5试验血液样本血浆游离血红蛋白(PFH)的测定B.5.1标准品和质控品加样：向96孔板每孔加人200μL空白CMH试剂、新鲜制备系列校准标准品和质控品，CMH试剂。设3个平行孔。B.5.3将96孔板密封后，置于平板报荡器上轻轻振荡1min～2min（中速，可设定为2档～3档，如250次/min)B,5.4在540nm波长处读取各孔吸光度值，然后根据标准曲线方程[见式(B.1)]计算得到所有样品的血浆游离血红蛋白浓度。B.6结果计算B,6.1利用吸光度值为织垒标(Y），校准标准品浓度（mg/mL)为横垒标（X），绘制标准曲线，获得回归方程： YY/T 1620—2018Y =aX + b(B,1 )式中;X-—校准标准品浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);Y—吸光度值；a—带数；b—常数.B.6.2根据公式(B.1)，由校准标准品和质控品的吸光度值(Y)，得到校准标准品和质控品的实际度(mg/mL)），然后根据式(