NY_T 560-2018小鹅瘟诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T560—2018代替NY/T560—2002小鹅瘟诊断技术Diagnostic techniques for gosling plague2018-09-01实施2018-05-07发布中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 560—2018前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T560—2002《小鹅瘟诊断技术》。与NY/T560—2002相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：“范围”部分增述了免疫荧光(IFA)试验和多聚酶链式反应(PCR)检测方法的适用性；“病毒分离”部分将“鹅胚接种”与“番鸭胚接种”合并为“鹅胚或番鸭胚接种”（见)；“间接酶联免疫吸附试验（间接ELISA)”修改为“夹心酶联免疫吸附试验（夹心ELISA)”（见3.2.2);增加了小鹅瘟病毒抗原和抗体间接免疫荧光方法（见3.2.3；4.3）；增加了小鹅瘟病毒PCR检测方法（见3.2.4）。本标准由农业农村部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAT/TC181)归口。本标准起草单位：扬州大学、中国动物疫病预防控制中心本标准主要起草人：秦爱建、钱琨、叶建强、蒋菲、邵红霞、刘洋。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-NY/T560—2002。I NY/T 560—2018引言小鹅瘟又称鹅细小病毒（Gooseparvovirus）病，或称德兹西氏病（Derzsysdisease），是维鹅的一种急性败血性传染病。世界所有养鹅的国家均有此病的发生。本病主要侵害1月龄以内雏鹅和雏番鸭，多呈最急性和急性感染而迅速致死。1月龄以上的小鹅发病减少，呈慢性过程。本病一且发生、流行，常引起大批维鹅死亡，造成重大经济损失。本病病原为小鹅瘟病毒，最早由我国方定一先生发现鉴定。根据其病毒分类地位，又称鹅细小病毒。应用中和试验、琼脂扩散试验等方法证明各国分离的毒株具有相同的抗原关系，即目前仅有一种血清型。小鹅瘟病毒与番鸭细小病毒存在抗原相关性，而与哺乳动物和其他禽类的细小病毒没有抗原相关性。本病病毒分离常用鹅胚或番鸭胚。鹅胚或番鸭胚原代细胞感染病毒后，用特异的鹅细小病毒多抗血清或单克隆抗体进行免疫荧光染色，能确定感染细胞内病毒的存在。PCR、双抗体夹心ELISA和冰冻切片等方法能快速检测病鹅组织样本中的小鹅瘟病毒。 NY/T560—2018小鹅瘟诊断技术1范围本标准规定了小鹅瘟诊断技术的要求。本标准所规定的病毒分离方法适用于小鹅瘟病毒分离；多聚酶链式反应（PCR）、琼脂扩散试验、中和试验、夹心酶联免疫吸附(夹心ELISA)试验、免疫荧光(IFA)试验等诊断方法适用于病毒分离株的鉴定、鹅群小鹅瘟检疫、流行病学调查和免疫鹅群抗体水平的检测。2临床症状与病理变化2.1流行病学主要致1月龄内的维鹅发病，发病率和病死率可达90%～100%，传播快。3周龄以内的番鸭也可感染，并发病死亡。随着日龄增大，发病率逐渐降低。成年鹅感染病毒通常不会出现临床症状。病鹅的排泄物含有大量病毒，是重要的传染源。2.2临床症状发病维鹅精神沉郁、昏睡，缩头垂翅，食欲减退；病鹅出现稀粪，粪便中含有气泡或纤维碎片，甚至有血黏液，肛门附近有稀粪黏附；常伴随着呼吸困难症状，脚发；少数病鹅有神经症状，并出现抽搐倒地死亡现象；病程2d3d,发病急且病死率高。2.3病理变化剖检肉眼可见小肠的中后段肠管肿胀变粗，肠壁紧张，肠道黏膜脱落与内容物形成同心圆栓塞（肠栓），易剥离，肠壁光滑且变薄，部分肠道卡他性出血。肝脏肿大淤血呈古铜色，胆囊稍有肿大，充满蓝绿色胆汁。肾脏肿胀，输尿管可见尿酸盐沉积；个别病死鹅胰腺有出血点；有神经症状的病死鹅脑膜充血或有出血点。2.4结果判定符合上述2.1、2.2和2.3基本特征的小鹅病例，可以初步判定为小鹅瘟。确诊需要病原学鉴定。3病毒的分离、检测和鉴定3.1病毒分离3.1.1仪器组织研磨器、恒温孵化箱、手持式照蛋器、无菌巴氏吸管、台式离心机（≥10000r/min）、一20℃冰箱、4℃冰箱。3.1.2耗材12日龄无小鹅瘟病毒抗体的鹅胚或番鸭胚、眼科剪、镊子、Eppendorf管（微量离心管）。3.1.3试剂0.015mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液（PBS)（见附录A中的A.2）、生理盐水（见A.9）、青霉素（10万IU/mL）、链霉素（10万IU/mL）。3.1.4方法及程序无菌取患病雏鹅或死亡雏鹅的肝、脾、肾、肠道等内脏器官，病料放置灭菌的平皿中，一20℃保存，作为病毒分离材料备用。1 NY/T560—20将组织剪碎、磨细，置于1.5mL的Eppendorf管中，用含有青霉素和链霉素各2000IU/mL的灭菌生理盐水或灭菌PBS（pH7.2)进行1：10稀释（W/V），37℃作用30min