NY 403-2000脱毒苹果母本树及苗木病毒检测技术规程.pdf

B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 403—2000脱毒苹果母本树及苗木病毒检测技术规程Rules for virus detection of virus-freemother tree and seedling apples2000-09-22 发布2000-12-01实施中华人民共和国农业部发 布 中华人民共和国农业行业标准脱毒苹果母本树及苗木病毒检测技术规程NY/T 403—2000中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话话国标准出版社秦皇岛印刷广印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印*开本880×12301/16　印张‘1/2　字数8千字2000年12月第一版　2000年12月第一次印刷印数 1--800标目429—46 NY/T 403--2000前 創言为了有效地实施对脱毒苹果苗木质量检验和管理，规范脱毒苗木市场，促进脱毒技术的推广，实现脱毒苹果苗木病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外苹果病毒检测技术必威体育精装版研究进展的基础上，结合当前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用指示植物检测和A蛋白夹心酶联免疫吸附检测。本规程内容包括脱毒苹果母本树及苗木病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。本标准的附录 A 是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标主要起草单位：农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心（济南）、山东省植物保护总站。本标主要起草人：李明立、刘敬东、商明清、华崇钊、孙作文、任宝珍。 中华人民共和国农业行业标准脱毒苹果母本树及NY/T 403--2000苗木病毒检测技术规程Rules for virus detection of virus-freemother tree and seedling apples1范围本标准规定了脱毒苹果母本树及苗木的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒苹果母本树(砧木原种、接穗)、组培苗及脱毒苗木的病毒检测。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准必威体育精装版版本的可能性。GB12943-1991苹果无病毒母本树和苗木检疫规程NY329—1997苹果无病毒苗木3 定义本标准采用下列定义。3.1苹果无病毒母本树用苹果无病毒原种材料繁育的用于提供品种接穗或营养系砧木的母株（见NY329一1997中3.1）。3.2苹果无病毒苗木用无病毒接穗和无病毒砧木繁育的苹果嫁接苗或无病毒材料通过组织培养方法繁育的苹果自根苗(见NY 329—1997 中 3.3)。4 检测对象苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV);苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV);苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)。5抽样5.1脱毒母本树抽样每株均需检测。春季从待检母本树上选取嫩芽或幼嫩叶片或花期的新鲜花瓣(休眠期取一年生枝条的皮层)作为检测样品。5.2组培苗的抽样5.2.1脱毒核心材料：每株均需检测。5.2.2扩繁组培苗：每次扩繁随机抽取1%～2%的样品检测。2000-12-01实施中华人民共和国农业部2000-09-22批准1 NY/T 403—20005.3出圃苗木的抽样采用分层取样或随机取样等方法抽取样品，抽样数量见表1。将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样，随机抽取10%的混合样品检测。苗木抽样数量标准表表1抽样最低数量，株苗木总数量,株抽样百分率，%1006~10≤10 0003~510 000注：不足抽样最低数量的全部作为混合样品。6 检测方法6.1指示植物检测法按GB12943-~1991中5.4病毒检验方法执行。6.2A蛋白夹心酶联免疫吸附检测法。检测方法见附录 A。7质量要求凡酶联免疫检测或指示植物检测呈阳性反应的为带毒株。母本树:病毒病株允许率为 0。脱毒苗木:病毒病株允许率≤3.0%。 NY/T 403—2000附录A(标准的附录)A蛋白夹心酶联免疫吸附检测法A1溶液配制所用化学试剂为分析纯级规格，用水为蒸馏水。A1.1 洗涤缓冲液(PBST,pH7.4)氯化钠(NaCI)8.00 g磷酸二氢钾(KH,PO)0.20 g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H,O)2. 93 g(或 Na2HPO4,1. 15 g)氯化钾(KCI)0.20 g吐温-20(Tween-20)0. 50 mL溶于蒸馏水中，定容至 1000 mL，4℃保存。A1.