SN 1161-2002衣原体感染检测方法 补体结合试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1161—2002衣原体感染检测方法补体结合试验Protocol of complement fixation-Test for chlamydia infection2002-11-25 发布2003-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN /T 1161--2002前言本标准的附录 A、附录B、附录 C、附录 D、附录 E均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖北出人境检验检疫局、湖北省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：徐涤平、黄晟、刘泽文、陈平、段正赢、颜小平、陈建军、杨宜生。 SN/T 1161--2002衣原体感染检测方法补体结合试验1 范围本标准规定的补体结合试验(CF)包括直接补体结合试验（Direct Complement Fixation Test，DCF)和间接补体结合试验(Indirect Complement Fixation Test,ICF)。DCF适用于猪以外的哺乳动物和鹦鹉、鸽(三年龄以上老鸽除外）、火鸡衣原体病的检疫和诊断。ICF适用于其他禽鸟和猪衣原体病的检疫和诊断。2 材料准备2.1器材：12mm×37mm试管、试管架、水浴箱、U型微量反应板（8×12孔）。2.2补体：由官方认可单位供应，按说明书使用和保存。试验前须对补体进行效价滴定。滴定方法见附录A。2.3溶血素：由官方认可单位供应。试验前须对溶血素进行效价滴定，以后每隔2个～3个月测定效价次。滴定方法见附录B。2.41%绵羊红细胞悬液：制备方法见附录C。2.5敏化红细胞：制备及使用方法见附录A。2.6被检血清:按常规方法采血,分离血清,要求不溶血、无腐败,在血清中加人 0.01%硫柳汞或 0.1%叠氮钠防腐,试验前需灭能。不同动物血清灭能的温度和时间见附录D。2.7抗原和标准阳性血清、指示血清、阴性血清：由宫方认可单位供应，按说明书使用。抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录E。3操作方法3.1直接补体结合试验3.1.1试管法：按表 1 的程序操作。试验要同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。表 1直接补体结合试验(试管法)单位为毫升被检血清各项对照抗补体阳性阴性抗原浴溶生理成分试验管效价对照血清血清对照血素盐水1:4主*161:32* 64[1+ 128]1:42 工作量1:412工作量血清0.10. 10. 2工作社0. 10. 10.10.10. 0.1抗原2单位0.20.20. 20.20. 20. 20. 20.2补体生理0. 10. 10. 20.4盐水 SN/T 1161--2002表1(续)单位为毫升各项对照被检血清阳性阴性抗原浴生理抗补体效价试验管成分对照盐水对照血清血清血素2工作量2工作址1:41: 32[1 : 1281:41:41181 + 161 : 64混勾，4℃ 16 h～18 h感作,取出后 37℃水浴30min敏化0. 20. 20. 20.20.20. 20. 20.20. 红细胞混匀，37℃水浴30min++++++1###结果1:32全全全25%50%75%全判定全溶全溶全溶全溶全溶不溶不溶溶溶浴不溶不溶微量法：用U型8X12孔微量反应板。按表2的程序操作。试验同时设抗补体对照、阳性血清对3. 1.2照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。直接补体结合试验（微量法）单位为微升表2各项对照被检血清阴性抗原溶生理抗补体阳性效价试验孔成分血清对照血素盐水对照血清2工作量2 工作量1# 41:16↓1: 321 + 61[1 + 1281:41:41:8252525252525252525血清2工作2525252525原2单位5050505050505050505050补体生理25 2550100盐水混匀,4 ℃ 16 h～~18 h 感作,取出后 37 C水浴 30 min敏化505050505050505050505050红细胞混匀,37C水浴 30min#--#+++++##+一结果全全1: 3225%50%75%全全全溶全溶全溶全溶全溶判定不溶不溶溶溶溶不溶不溶间接补体结合试验试管法：按表3的程序操作。单位为毫升间接补体结合试验（试管法）表 3直接补间接补反对照被检血清抗原反对照抗补体对照阳性阴性对照效价成分指示血清试验管血清血清1:41工作量1:41工作量1 : 641 : 1281:161 : 321:41*80.10. 10. 10. 10.10. 1血清0. 10.10.11工作量0.10.10. 10.10. 10.10. 10.10. 10. 1抗原2 SN/T 1161