SN_T 3565-2013国境口岸布鲁氏菌上转发光检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3565—2013国境口岸布鲁氏菌上转发光检测方法Detection of Brucella by up-converting phosphor technology at frontier ports2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3565—2013前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所、中华人民共和国河北出入境检验检疫局。本标准主要起草人：田桢干、陆晔、周蕾、陈磊、贾巍、曹敏、聂维忠、何宇平、张继伦、章琪、李平、卢钟山。一11 SN/T 3565—2013！国境口岸布鲁氏菌上转发光检测方法-- 1范围本标准规定了出人境口岸布鲁氏菌上转发光法的检测对象、检测方法及结果报告。本标准适用于国境口岸布鲁氏菌的快速筛查检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的引用文件，仅注期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1861—2007出人境口岸突发公共卫生事件应急处理规程总则WS 269布鲁氏菌病诊断标准3＇术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1布鲁氏菌 Brucella一种革兰氏阴性、细胞内寄生菌，能引起人和多种动物的急性和慢性感染。由布鲁氏菌引起的人畜共患的传染、变态反应性疾病称为布鲁氏菌病。布鲁氏菌可引发世界范围内人和牲畜及野生哺乳动物的感染，也是被应用为生物战剂之一的致病菌。3.2上转发光技术up-converting phosphor technology; UPT利用稀土元素合成的_上转发光材料（up-convertingphosphor，UCP）晶体颗粒作为生物示踪物，进而与免疫层析技术、生物传感技术相结合，发展而成的新型高敏感生物检测技术。UCP颗粒具有独特的上转发光现象，即可由低能红外光激发，发射高能可见光，据此被称为上转发光材料。UCP颗粒这种独特的发光特性，使得以其作为生物示踪物的上转发光技术在检测中可以排除外界的信号干扰，因而具有更高的检测敏感性与可靠性。4检测对象4.1国境口岸疑似感染布鲁氏菌人员的血液、其他体液和排泄物等。4.2国境口岸有布鲁氏菌污染嫌疑的食品、饮用水、行李、邮包、交通工具及其他疑似被污染的国境口岸场所和环境检材等。4.3国境口岸疑似感染布鲁氏菌的牲畜的脾脏及小动物的户体等生物检材。5样本采集样本采集执行 SN/T1861--2007中的附录E。1 SN/T 3565—20136准备6.1试剂和材料6.1.1样本预处理液采用布鲁氏菌（BRG）定量测定试剂盒1）（上转发光法）中配备的样品预处理液，也可采用生理盐水或0.03mol/ 的磷酸盐缓冲液。6.1.2样本处理液采用布鲁氏菌（BRG)定量测定式剂盒（二转发光法）中配备的样处理液.也可采用含1%NP-40的0.03 mol/I磷酸盐缓冲液。6.1.3UPT检测试纸条采用布鲁氏菌（BRG)定量测定试剂盒（上转轰光法）中配备的布鲁氏菌试纸条，也可采用下述方法制备：a）结合垫制备：将1mg/ml.Uer-布鲁消单抗标记物喷于玻璃纤维上，45℃，45min，烘干.剪切为1cm宽的长条备用；b）分析膜制备：将2mg/ml鲁民菌单抗、2mg/mL羊抗鼠IgG喷点在硝酸纤维素膜上分别作为检测带与质控带，45℃，01in.烘于，价用；c)吸水垫准备：将吸水纸剪切为3cm宽的长条备用；d)样品垫准备：将玻璃纤维剪切为lcm宽的长条备用；试纸组装：将吸水垫、分析膜结合垫、样品垫依次重叠粘贴在粘性底衬上备用；e)f)试纸剪切成型：将组装后的试纸剪切为每祭4cm窝，暨于试纸外壳中，即为可以使用的试纸成品。6.2仪器设备本方法所需仪器设备如下：上转发光免疫分析仪1）生物安全柜；-高压灭菌锅;一旋涡振荡器；微量可调移液器一套（含以下两种规格：2μL～10μl、100μl～200μL)和相应吸头。7样本预处理7.1血液及液体样品血液可直接用于检测，其他体液等液体标本取50uL样品加人50uL预处理液中，混勾备用。7.2可疑粉末、物品及环境采样样品将采集样本的棉签在500uL样品预处理液中涮洗，混匀备用。1）本试验采用军事医学科学院研制的UPT-3A上转发光免疫分析仪及相关试剂进行检测，如有其他同类技术产品也可按照此规程进行操作。2 SN/T 3565---20137.3动物脏器等生物样品取0.5cm²的样品加1mL的样品预处理液，匀浆处理备用。8检测8.1取10μL预处理样本与90μI.样本处理液混匀备用。8