WS 122-1999全血中血红蛋白的测定.pdf

C 50备泰号：929-2000WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 122--1999全血中血红蛋白的测定Quantitative determinationof hemoglobin in whole blood2000-05-01实施1999-12-09发布中华人民共和国卫生部‧发 布 WS/T 122-1999前言全血中血红蛋白测定是一种临床常用试验，需有相应的标准进行规范，本标准因此而制定。本标准从2000年5月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准由解放军总医院临床检验科负责起草。本标准主要起草人：丛玉隆、邓新立。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负贵解释。@测 中华人民共和国卫生行业标准全血中血红蛋白的测定WS/T 122 -- 1999Quantitative determinationof hemoglobin in whole blood1 范围本标准规定了全血中血红蛋白测定的方法、结果的表达及氰化高铁血红蛋白标准物。本标准适用于临床实验室的常规检验。2 定义本标准采用下列定义。2.1 高铁血红蛋白铁原子已被氧化成高铁离子的血红蛋白。可用英文缩写 H;表示。2.2氰化高铁血红蛋白铁原子被氧化成高铁离子，高铁离子已同氰离子相结合的血红蛋白。可用英文缩写 HiCN表示。2. 3总血红蛋白正常存在人循环血中的所有血红蛋白衍生物，应包括脱氧血红蛋白、氧合血红蛋白、硫化血红蛋白、碳氧血红蛋白和高铁血红蛋白。3 检测原理在溶血液中，血红蛋白（硫化血红蛋白除外)中亚铁离子(Fe2+)被高铁氰化钾氧化成高铁离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白。高铁血红蛋白同氰化钾中的氰离子反应生成氰化高铁血红蛋白。反应应在18～25℃中进行。加入非离子表面活性剂可加快红细胞的溶解，减少脂蛋白沉淀产生的溶液混浊。在仪器上进行测定。化高铁血红蛋白在波长540 nm左右有一个较宽的吸收峰蜂，它在540 nm处的吸光度同它在溶液中的浓度成正比。标本中血红蛋白的浓度可通过先测得吸光度，然后从标准曲线上按吸光度读取。也可以同时与一标准溶液比色而得出结果。4 材料与装置4.1玻璃器材要求试验中的玻璃器材准确度为A级，清洁度为化学级。微量吸管和沙利氏吸管要求为20 μL士0.1 μL,吸量管为 0.5mL士0.005 mL,移液管为 5.0 mL士0.005mL或 10.0 mL±0.03 mL。容量瓶100 mL±0.08 mL或 1 000 mL±0. 3 mL。4.2 试剂4.2.1试剂组成：鼠化钾(KCN),0.050 gs高铁氰化钾[K;Fe(CN)。],0.200 g32000 -05-01 实施中华人民共和国卫生部1999~12-09批准1 WS/T 122— 1999磷酸二氢钾(KH2PO4),0.140 g非离子表面活性剂,0. 5mL～1. 0 mL;加蒸馏水至1000 mL。4.2.2非离子表面活性剂可用 Triton X-100(1 mL/L),Saponic 218 等。4.2.3试剂应是清亮的淡黄色溶液，不吸收波长大于480nm的光。试剂的pH值在7.0～7.4之间。其用冰点法测量的渗量应在 6~7 mmol /L 之间。要求血红蛋白在 5 min 内完全转化成氰化高铁血红蛋白。如果试剂变混浊，则应弃去。试剂应避光保存在一容量较大且密封的棕色硼硅玻璃瓶中。试剂应保持新鲜，至少1月配制1次。试剂不可冰冻，否则其中的高铁氰化钾会被破坏，加入乙醇、甲醇、乙二醇或甘油可以防止其分解。4.2.4试剂中的氰化钾为剧毒物质，要注意操作安全。4.3仪器使用双波长的分光光度计测量最准确，也可使用各种经过校正的光度计和比色计。测量待检标本的血红蛋白浓度，是先测量其在540nm处的吸光度，然后再经过换算所得。仪器必须经过校正。校正的方法是在仪器上测定HiCN 标准物，并根据此标准物的光谱特性来对仪器进行调试。校正的主要内容包括：a）工作波长：将标准物放在待测光度计中，从500nm至580nm测量其吸光度，如果最大吸光度在540nm处，则仪器波长准确，否则应对仪器进行调试。在常规工作中，如仪器最大吸光度处的波长在540nm士5nm范围内，也可用此波长作为工作波长，仪器的测量结果也是准确的。b）校正系数,即K值的测试和计算，见 10.4.1。c）检测结果的线性：即检查仪器检测HiCN 的吸光度是否同HiCN 的浓度成正比。将已知浓度的HiCN标准物准确稀释成各种浓度，分别测定其吸光度。然后以稀释液浓度为横坐标，其对应的吸光度为纵坐标进行描点，并通过各点作直线。如测试各点均在直线上，则证实仪器的线性良好。如有个别点不在直线上，作直线时应使直线通过尽多的点，将不在直线上的点的吸光度与所代表的浓度在直线的吸光度比较，如两者之差在5%以内