NYT 726-2003饲料中杆菌肽锌的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 120B 20中华人民共和国农业行业标准NY/T 726—2003饲料中杆菌肽锌的测定高效液相色谱法Determination of bacitracin zinc in feeds--High performance liquid chromatography2003-12-01发布2004-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 726—2003前言本标准参考了AOAC65、1168(1982)《预混料中杆菌肽锌的测定方法》和有关国内外文献，并结合我国的实际情况制定的。本标准的附录 A是规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人：高生、绕正华、范理、李丽蓓、杨曙明。 NY/T 726-2003饲料中杆菌肽锌的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了以液相色谱仪测定饲料中杆菌肽锌的方法。本标准适用于猪、鸡添加剂预混料中杆菌肽锌含量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3方法原理添加剂预混料中的杆菌肽锌可用酸化的有机溶剂体系提取，离心，取上清液用于液相色谱分析。4试剂和材料以下试剂除特殊标明均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水的规定。4.1 磷酸盐缓冲液:pH6.0,称取 1.5 g磷酸氢二钾和8.5 g磷酸二氢钾,溶解于 1 L水中。4.2磷酸盐-EDTA缓冲液:pH4.5，称取13.6g磷酸二氢钾和2.5g乙二胺四乙酸二钠溶解于1L水中。4.3杆菌肽锌标准液：4.3.1标准贮备液的配制：准确称取杆菌肽锌标准品150.0mg，用提取溶液溶解，并定容100mL，此溶液杆菌肽锌浓度为1500 mg/L。4.3.2中间液：吸取标推贮备液(4.3.1)10mL,用提取溶液定容至50mL。该溶液杆菌肽锌的浓度为300 mg/L.4.3.3工作液：吸取中间液（4.3.2)0.20mL、1.0mL、5.0mL，用提取溶液定容至10mL该溶液杆菌肽锌的浓度分别为 6 mg/L、30 mg/L、150 mg/L。4.4溶剂系统：按表1配制。各溶剂标识的体积量取各溶剂置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。表 1 溶剂系统表体积/mL溶剂B溶液提取溶液A溶液28040乙腩0甲醇122820200磷酸盐-EDTA缓冲液030磷酸盐缓冲液01. 2浓磷酸0 NY/T 726—20035仪器与设备5.1分析天平：感量 0.001g;感量 0.0001 g。5.2超声波水浴。5.3 离心机:4 000 r/min。5.4高效液相色谱仪：配有紫外检测器和2.5×150mmC1：色谱柱。6样品的制备根据GB/T14699.1取具代表性的饲料样品，粉碎通过0.45mm孔径筛，充分混匀后装人磨口瓶中备用。7分析步骤7、1提取称取试样2.000g，准确加入提取溶液10mL，充分摇动使试样与提取溶液完全混合，置超声波水浴中超声提取15min，其间不时用手摇动，取上层液于离心机上4000r/min，离心5min。直接取上清液用于高效液相色谱测定。7.2测定7.2.1液相色谱条件a）1色谱柱：2.5×150mm、4μmC18色谱柱。b)流动相：取溶剂系统表1A溶液:B溶液为 41+59混合，用浓度为c(NaOH)=1 mol/L氢氧化钠溶液调 pH 为 6.8。c）检测器：可调波长检测器，检测波长为 254 nm。d)进样量：20 μI。7.2.2定性定量方法在上述条件下，以杆菌肽锌三个主要活性成分(见附录 A)的峰保留时间，比较进行定性确认，以三个主要活性成分的峰面积加和值与相近浓度的杆菌肽锌标准液的峰面积加和值比较进行定量计算。8分析结果的表述以质量分数表示的试样中杆菌肽锌的含量按式(1)计算：A.m..Vr =:(1)A, -m.V:式中：以质量分数表示的试样中杆菌肽锌的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A--试样中杆菌肽锌的加和峰值；1A。一一标准杆菌肽锌的加和峰值;-标准杆菌肽锌的进样质量，单位为纳克（ng)；m.V-注入 HPLC的体积,单位为微升(μL);/称取试样的质量，单位为克（g）m1V.一试样的定容体积，单位为毫升（mL）。/9允许差1两次平行检验结果的相对偏差小于等于10%。一21 NY/T 726--2003附录A(规范性附录)杆菌肽锌标准图谱100. 00 -o22175. 00