SN_T 2916-2011出口食品中桔霉素的测定方法 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2916-2011出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法Determination of citrinin in food for export-Immunoaffinity column clean-up and HPLC method2011-05-31 发布2011-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局KX SN/T 2916—2011前，言本标准按照GB/T1.1一2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国山东出人境检验检疫局负责起草本标准主要起草人：鲍蕾、许艳丽、张艺兵、吕宁、吴振兴、石媛螈 SN/T 2916—2011出口食品中桔霉素的测定方法免疫亲和柱净化~高效液相色谱法1范围本标准规定了使用免疫亲和柱净化结合高效液相色谱测定出口食品中桔霉素的方法。本标准适用于大米、玉米、辣椒、红曲制品中桔霉素的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中的桔霉素用甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧光检测器测定桔霉素的含量，外标法定量。4试剂和材料除特殊规定外，所用化学试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 甲醇:HPLC级。4.2 乙腈:HPLC级。4.3 三氟乙酸:HPLC级。4.4氢氧化钠。4.52mol/L的氢氧化钠溶液：称取80.0g固体氢氧化钠（4.4)，溶于1000mL水中。4.6桔霉素(citrinin)标准品：1 mg,纯度≥99.0%。4.7标准储备液:准确称取一定量的桔霉素粉末(4.6)以甲醇(4.1)溶解并定容至 10.0 mL作为标准储备液,浓度为100 μg/mL，于 4℃下保存。4.8标准中间储备液:准确移取 1.0 mL 上述桔霉素标准储备液(4.7)于 10 mL容量瓶中,用甲醇定容,浓度为 10 μg/mL，于4℃下保存。4.9标准工作液：用上述标准中间储备液（4.8），根据需要配制成适当浓度的标准工作液。4.10免疫亲和柱：CitriTestTMHPLC柱（非商业性声明），或者相当。4.11三氟乙酸水溶液：1000mL超纯水中加人0.5 mL三氟乙酸（4.3），氢氧化钠溶液（4.5)调节pH2稀释液：用氢氧化钠溶液(4.5)将三氟乙酸水溶液(4.11)的pH调节至7.5。4.13洗脱液：甲醇-三氟乙酸水溶液（4.11)（70十30，体积比）。1 SN/T 2916—20115仪器与设备5.1分析天平：感量 0.001g。5.2高速均质器:12 000 r/min。5.3高效液相色谱仪配荧光检测器。5.4混匀器。5.5纯水系统。5.6玻璃纤维滤纸。6操作方法6.1提取称取粉碎样品10.0g(精确至0.1g)于250mL具塞锥形瓶中，加人50mL甲醇-水(70+30,体积比)提取液，以均质器高速搅拌提取2min,过滤,得滤液。移取 1.0mL上步的滤液，置于另一干净的容器中，加人49 mL稀释液（4.12)稀释、混匀。以玻璃纤维滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化。6.2免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL(相当于0.04g试样）上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s～2滴/s的流速全部通过亲和柱：加入_5mL稀释液（4.12)以1滴/s～2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液；准确加入1.0mL洗脱液（4.13)进行洗脱，洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃武管中，供检测用。6.3　测定6.3.1色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C1s柱长150 mml,内径4J6 mm，粒度5μm，或相当者。6.3. 1.1↑流动相：乙腈-三氟乙酸水溶液（60千40,体积比)流速:1.0 mL/min。检测条件：激发波长331nm，发射波长500,nm进样量：标准5μL、样品 100 μL6.3.2色谱测定移取适量的标准工作液，以甲醇稀释成5个不同浓度的标准工作液，以其保留时间进行定性，以化学工作站建立标准工作液中桔霉素的响应值与桔霉素含量的线形方程，并对样液的色谱数据进行处理。在上述色谱条件下,桔霉素的保留时间为 3.18 min左右,参见图 A.1。6.3.3空白实验除不加试样外，均按上述步骤进行。7结果计算和表述用色谱处理器或按式(1)计算试样中的桔霉素含量，计算结果应将空白值扣除。2 SN/T 2916—2011cXVSr(1)X