SN_T 3292-2012嗜松枝干溃疡病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3292-2012嗜松枝干溃疡病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Atropellis piniphila (Weir) Lohman et Cash2012-10-23 发布2013-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准嗜松枝干溃疡病菌检疫鉴定方法SN/T 3292—2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 www. spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.75字数 16 干字2013年4月第一版2013年4月第一次印刷印数 11600*书号：155066·2-24690 SN/T 3292—2012前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：李百胜、纪睿、廖太林、安榆林、吴翠萍。T SN/T 3292---2012嗜松枝干溃疡病菌检疫鉴定方法范围1本标准规定了植物检疫中嗜松枝干溃疡病菌Atropellis piniphila（Weir）Lohman et Cash 的检疫鉴定方法。本标准适用于来自嗜松枝干溃疡病菌发生国家和地区的松属寄主植物（参见附录A)的苗木、木材及木质包装的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3原理3.1分类地位英文名:Branch and trunk cankor of pine, fg blight学名:Atropellis piniphila （Wcir) LdhmanJet CashWeir, Atropqllis arizgnica Lohman . Cash异名:Cenangium piniphilμr嗜松枝干溃疡病菌隶属真菌界（Fungi），囊菌亚汀（Ascomycotina），柔膜菌目（Helotiales），黑皮柔膜菌属（Atropellis）。3.2传播途径嗜松枝干溃疡病菌近距离主要通过子囊孢子随气流进行传播，远距离主要通过携带该病菌的苗木、木材及木质包装进行传播。3.3鉴定原理嗜松枝干溃疡病菌的形态特征(参见附录B)是其检疫鉴定的主要依据，同时参考该病菌的发生国家和地区、寄主范围、传播途径以及危害症状。4仪器和用具4.1仪器光学显微镜（具油镜和测微尺）、电子天平、超净工作台、光照培养箱、高压灭菌锅。4.2　用具培养皿、烧杯、三角瓶、试管、镊子、剪刀、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯。 SN/T 3292-20125 试剂和培养基5.1试剂麦芽糖、蛋白陈、琼脂、无菌水、75%酒精、1.25%次氯酸钠、氢氧化钾。5.2培养基麦芽糖琼脂培养基(参见附录C)。6检疫鉴定方法6.1抽样按SN/T2122规定进行抽样。6.2现场查验抽取的苗木、木材、木质包装，仔细观察针叶是否褪色，表面有无流脂、溃疡斑，溃疡斑内有无黑褐色的子实体（子囊盘），用斧子、锯子或刀片分别横向、纵向切开，仔细观察溃疡斑下面的木质部上是否有特征性的蓝黑色污渍（在蓝黑色区域的边缘，木质部通常呈红色或褐色），将可疑症状样本带回实验室作进一步检验。6.3实验室检验6.3.1切片检验将疑似发病样品选取病健交界处或带有黑点部分的组织切片，置于载玻片上，以无菌水作为浮载剂，在显微镜下进行观察，或进行保湿培养后再做镜检。6.3.2保湿培养苗木取发病苗木的主根和侧根，用75%酒精消毒1min，用无菌水冲洗3次，切取根部病健交界处3mm～5 mm大小的组织置于垫三层灭菌湿滤纸的培养Ⅲ中，在 20℃培养箱中培养，黑暗和光照各12 h交替,培养 7d～10 d。木材、木质包装取发病树枝、干或具溃疡斑木质部的病健交界处，用75%酒精消毒1min，无菌水冲洗3次，切取3mm～5mm大小的组织置于垫三层灭菌湿滤纸的培养皿中，在20℃培养箱中培养，黑暗和光照各12 h交替,培养 7d～10 d。6.3.3分离培养培养7d～10 d后，观察种子表面或植物组织表面是否有菌丝生长，如有，挑取少量菌丝转到麦芽糖琼脂培养基，在20℃培养箱中，黑暗和光照各12h交替培养，直至产生病菌繁殖器官。在显微镜下观察有性繁殖器官，如子囊盘、子囊和子孢子等。2 SN/T 32