SNT 2117-2008伪哥伦比亚根结线虫检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2117—2008伪哥伦比亚根结线虫检疫鉴定方法Identification and quarantine of Meloidogyne fallax2008-09-04 发布2009-03-16 实施→中华人民共和国法食层挂 19165荐 玫海真1发布数码防伪，国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2117—2008前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C 和附录 D均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：杜宇、丁元明、寸东义、梅华全、曹云华、段禄华、周剑、和捷、刘忠善。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2117—2008伪哥伦比亚根结线虫检疫鉴定方法1 范围本标准规定了伪哥伦比亚根结线虫的检疫鉴定方法。本标准适用于进出境植物及植物产品、土壤等传带的伪哥伦比亚根结线虫。2　符号本标准使用的符号源于De Man公式，并作了少部分修改：n—标本数;L-体长（mm或 μm，头端至尾端的中线距离，不包括尾尖突）；体长/最大体宽；体长/尾长（尾长指肛门或泄殖腔口至尾端的长度，不包括尾尖突）；W.最大卵宽；-St-口针长度;Sp-交合刺长度；h-透明尾的长度；T-尾长;BW最大体宽；EP-排泄孔至体最前端的距离；VA-阴门至肛门的距离；VL阴门宽度。3原理3.1伪哥伦比亚根结线虫的学名为 Meloidogyne fallax Karssen,1996,异名为 Meloidogyne chitwoodiB-type Karssen,1995,英文名为 False columbia root-knot nematode;隶属于线虫门 Nematoda，侧尾腺纲 Secernentea，垫刃目Tylenchida，胞囊科 Heteroderidae，根结线虫亚科 Meloidogyninae，根结线虫属Meloidog yne .3.2伪哥伦比亚根结线虫属侵染寄主根部的固定内寄生线虫，2龄幼虫可在土壤中生存一段时间，是惟一可迁移的侵染期虫态，雌虫是固定在植物根部或块茎组织内的侵染期虫态。因此，伪哥伦比亚根结线虫可随着染虫植物组织和土壤传播扩散，其形态特征、地理分布、寄主范围、生物学特性、为害症状和传播途径等(参见附录A)是检疫鉴定的依据。4仪器及用具4.1#样品袋和标签。4.2贝尔曼漏斗分离器或浅盘、标准套筛（40目～500目）。4.3数字智能显微镜（含照相装置、电脑和测微数据分析系统软件）、体视显微镜。4.41恒温水浴锅。4.5凹面皿、培养皿、载玻片、盖玻片、三角瓶、试管。4.6酒精灯、线虫挑针。4.7控温电热平板、大容量离心机。1 SN/T 2117--20084.8普通冰箱和低温冰箱（—4℃～—10℃，20℃～—40℃，－70℃以下）。5试剂和材料5.1 指甲油、石蜡。5.2线虫保存液(配方参见附录 B中的第B.1章）。5.3线虫脱水液(配方参见附录 B中的第B.2章）。5.4无水乙醇（纯度96%以上）、70%的酒精、碳酸钙、福尔马林（4%甲醛溶液）、甘油、硫酸镁、高岭土、次氯酸钠溶液或漂白粉精片。6现场检疫6.1核查和直观检验检查受检植物及其产品是否带有根、块茎，以及土壤或介质土，是否是伪哥伦比亚根结线虫的寄主等。根上是否有根结,块茎上是否有疙瘩状变异，如果是来自疫区的马铃薯，应去皮检查是否有腐烂或棕黑色变异等症状。6.2抽样和取样如果有为害症状的，抽取有为害症状的受检物。如果无为害症状的，或土壤、介质土等，则随机抽样。7 实验室检验7.1获取线虫的方法7.1.1 直接法在体视显微镜下，将带有症状的植物组织浸泡于盛有自来水的培养Ⅲ中，用小刀或挑针刺破根结或小疙瘩,检查球状虫体或卵块是否存在,并轻轻从组织上剥离附着的雌虫虫体。将所获取的雌虫和卵块用吸管转移至0.9%的氯化钠水溶液中,将幼虫和雄虫移至蒸馏水中,待用。7.1.2分离法从未见症状的植物根或块茎（土壤和介质土分离2龄幼虫或雄虫，可采用贝尔曼漏斗法或浅盘法。7.2标本制作线虫鉴定前，对雌虫虫体需进行会阴花纹的切片处理，2龄幼虫、雄虫和会阴花纹的切片需制作临时玻片或永久玻片(参见附录C)。在显微镜下，对线虫进行形态鉴定、测计和描述。7.3形态鉴定7.3.1测量值 雌虫(n=30)L=404 μm～720 μm; BW= 256 μm～464 μm; EP= 12. 6 μm～32. 9 μm;VA - 12. 6 μm~19.0 μm;VL =20.2 μm~28.4 μm;St=13.9 μm~15.2 μm。7. 3. 1.2 雄虫(n=30)L=736 μm~1 520 μm;a-21.2~53.5;c=82.