SNT 2062-2008进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2062—2008进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法1Determination of macrolide antibiotics residues in royal jelly forimport and export-LC-MS/MS method2008-04-29 发布2008-11-01实施中华人民共和国发布5国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2062-2008前言本标准的附录 A、附录 B和附录 C 均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、奚君阳、钱艳、陈笑梅、黄雷芳。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2062-—2008进出口蜂王浆中大环内酯类抗生素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法1 范围本标准规定了蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的检测。2方法提要样品用甲醇沉淀蛋白质，在磷酸盐缓冲盐溶液介质下,再用C1固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。3.1乙腈：高效液相色谱级。3.2甲醇：高效液相色谱级。3.3甲酸：高效液相色谱级。3.4氢氧化钠。3.5 磷酸二氢钠。3.60.1mol/L氢氧化钠溶液：称取 4g氢氧化钠,并用水稀释至1 L。3.7甲醇水溶液：甲醇-水（2十8，体积比）。3.8磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值到8.0,最后用水稀释至1L。3.9螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素磷酸盐、泰乐菌素酒石酸盐、红霉素、罗红霉素、交沙霉素标准品：纯度大于等于 95%,参见附录 A表 A.1。3.107种大环内酯标准储备溶液：称取适量标准品（3.9），分别用甲醇溶解，溶液浓度为100 uμg/mL，1℃～4℃冰箱保存。有效期三个月。3.11标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成2.5ng/mL、5ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有 5 μg/kg、10 ug/kg、20 μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg 大环内酯。3.12C18固相萃取小柱，500 mg 或相当者，使用前依次用 5mL甲醇,5mL水预洗。4仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2旋转蒸发器。4.3固相萃取装置。4.4高速离心机：7000r/min。4.5 pH计。1 SN/T 2062—20084.6旋涡混合器。4.7氮吹仪。5试样制备与保存取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装人样品瓶中,密封,并标明标记。份作为试验样,另一份在一18℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤6.1提取称取2g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中,加,5.mL,水，混匀，静置5min,再加甲醇至10.0mL，于旋涡混合器上以2000r/min 混匀1min，于6000 r/min离心5min，过滤，移取5.0mL滤液，加15mL磷酸盐缓冲溶液(3.8)稀释，混匀。6.2净化将溶液转移至固相萃取小柱中(3.12)，再用5mL水和5mL.甲醇水溶液(3.7)依次洗涤浓缩瓶，洗涤液过固相萃取小柱,弃去流出液，在负压下抽干，用 6 mL甲醇洗脱,控制流速1 mL/min～2 mL/min，收集全部洗脱液于10mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下平缓氮气吹至约1mL，用水定容至2.0mL，混匀,溶液过0.45 μm,滤膜;供液相色谱-串联质谱仪测定6.3 测定6.3.1液相色谱-串联质谱条件色谱柱:Cg柱,5μm,150 mmX4.6.mm(内径)或相当者a)b）流动相梯度洗脱程序（见表1）；梯度洗脱程序表1L乙腈/%0.15%甲酸水溶液/%时间/min8072002080280207. 557.6/ 955958.780208.88020.14c)流速:400 μL/min;d)进样量：20μL；e)．离子源：电喷雾离子源；f)扫描方式：正离子扫描：检测方式：多反应监测；g)雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测h)要求,参考条件参见附录 B表 B.1;监测离子对（m/z）：螺旋霉素84