SN 1617-2005可可肿枝病毒检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1617—2005可可肿枝病毒检测方法Detection of Cacao swollen shoot virus2005-08-18 发布2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准可可肿枝病毒检测方法SN/T 1617—2005* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*印张0.75　字数17千字开本 880×1230 1/162005年11月第一版2005年11月第一次印刷*由本社发行中心调换如有印装差错版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1617—2005前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C 为规范性附录,附录 D 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所负责起草，中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局参加起草。本标准主要起草人：魏梅生、相宁、李桂芬、吴翠萍、郭京泽。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1617—2005可可肿枝病毒检测方法1范围本标准确立了可可肿枝病毒检测的基本原则和方法。本标准适用于可可肿枝病毒进境种质的检疫检测。2原理2. 1 可可肿枝病毒学名与分类地位学名 :Cacao swollen shoot virus缩写:CSSV分类地位：花椰莱花叶病毒科（Caulimoviridae）;杆菌状DNA病毒属（Badnauirus）。2. 2寄主范围重要的自然寄主有可可（Theobroma cacao）、厚皮可乐果（Cola chlamydantha）、吉贝（Ceiba pen-tandra)大可乐果变近无毛变种(Cola gigantean var.glabrescens)和一种苹婆属植物 Sterculia tragacantha。人工接种还可侵染木棉科（Bombacaceae）、椴树科（Tiliaciae）、梧桐科（Sterculiaceae）、锦葵科(Malvaceae)等 30 种植物,其中猴面包树(Adansnia digitata）和 Cola cordifolia 易感病。2. 3病害症状2.3. 1 肿枝生长较快的枝条节、节间和末梢发生肿大，一些分离物还能使根部，特别是根尖产生肿大，有时侧根坏死。肿茎和肿根症状中，次生木质部和韧皮部都有所增加，但木质部不发生坏死。2.3.2 叶片叶片上的症状最初表现出明脉，形成网纹状，接着沿叶脉变红，随着叶片变绿而坚硬，红脉逐渐消失，有的叶片则产生褪绿，叶片褪绿斑部分组织不分化，其中有小型退化的叶绿体，细胞间隙缩小。2.3.3果实幼嫩的果英，形成墨绿或浅绿的斑驳，后期则发展成深红色大理石状纹。受侵果荚呈圆形比正常的果荚小,其中可可豆的质量只有健康的一半，可可豆比正常的要扁平，子叶呈灰白色。2.4分布地区分布于加纳、科特迪瓦、尼日利亚、多哥、塞拉利昂、斯里兰卡、马来西亚。2. 5传播途径可可肿枝病毒可通过嫁接、机械接种和多种粉传播。粉传播最主要的种有尼兰粉（Plano-coccoides njalensis）、肯尼亚咖啡粉（Planococcuskenyae）、橘粉蚜（Planococcus citri）和热带弗氏粉（Ferrisia virgata）。若虫和雌成虫是有效的传毒介体，但雄成虫不传播病毒，粉的传毒机制比较接近于半持久性，但尼兰粉若虫在饲毒后蜕皮仍有保毒能力。2.6粒体形态可可肿枝病毒粒体杆菌状,长度为121 nm～130 nm,宽为 28 nm。2.7 基因组病毒基因组为双链环状 DNA,有 2 个不连续区,基因组全序列为 7.4 kb。 SN/T 1617--20053仪器设备、用具及试剂3.1仪器设备透射电子显微镜、酶联检测仪、天平（感量，1/1000 g）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪、隔离温室、榨汁机、水浴锅等。3.2用具可调移液器(200 μL、20 μL、2 μL）、可调移液器头、酶联板、eppendorf 管、指型管、研钵等。3.3试剂酶联测定试剂(见附录 A)、免疫诱捕聚合酶链式反应检测试剂(见附录 B)和电镜观察样品前处理试剂(见附录 C)。4检测方法4. 1 诊断寄主可可Amelonado品种对CSSV很敏感，可可豆经粉传毒或机械接种，幼苗在20d～30d内，叶部出现沿脉变红及褪绿症状,2 周～12 周后肿大,根变成水龙头状。黄麻属植物（Corchorus spp.）对多数毒株敏感，很快死亡。有些毒株引起吉贝，厚皮可乐果，大可乐果暂时沿叶脉褪绿症状，猴面包