SC_T 3048-2014鱼类鲜度指标K值的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.120.30x 20SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 3048—2014鱼类鲜度指标K值的测定高效液相色谱法Determination of K value as fishery freshness index-High performance liquid chromatography2014-03-24 发布2014-06-01实施中华人民共和国农业部5发布 SC/T 言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会（SAC/TC156/SC3)归口。本标准起草单位：福建省水产研究所、南海水产研究所、农业部渔业产品质量监督检验测试中心（厦门）、北京市水产技术推广站。本标准主要起草人：钱卓真、汤水粉、杨贤庆、吴成业、刘淑集、张园、曹爱英。 SC/T 3048—2014鱼类鲜度指标K值的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了鱼类鲜度指标K值的高效液相色谱测定方法。本标准适用于鱼类可食部分中鲜度指标K值的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1腺苷三磷酸降解产物the breakdown products of ATP鱼类死后，其肌肉内腺苷三磷酸（Adenosinc Triphosphatc，ATP)依次降解为腺苷二磷酸（Adenosine Diphosphatc,ADP)、腺苷酸(Adenosine Monophosphate,AMP)、肌苷酸(Inosinic Acid,IMP)、次黄嘌呤核苷(Inosine,HxR)和次黄嘌呤(Hypoxanthine,Hx)。3. 2K值 K valueK值是腺苷三磷酸降解产物次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤量之和与腺苷三磷酸关联化合物总量（ATP+ADP+AMP十IMP+HxR+Hx)的百分比。4　测定方法4.1方法原理样品中的腺苷三磷酸及其降解产物用高氯酸提取，氢氧化钠溶液调节pH,沉淀，除去杂质，用C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量；以测得的次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤量之和与腺苷三磷酸关联化合物总量的百分比作为鲜度指标。4.2试剂和材料所用试剂除另有规定外，均为分析纯。4.2.1水：试验用水应符合GB/T 6682中一级水指标。4.2.2 磷酸。4.2.3高氯酸。4.2.4氢氧化钠。4.2.5磷酸二氢钾(KH2PO4）。4.2.6磷酸氢二钾(K2HPO.·3H2O)。4.2.710%(V/V)高氯酸溶液：量取高氯酸50mL，用水稀释至500mL,并置于4℃冰箱中冷藏保存。4.2.85%(V/V)高氯酸溶液：量取高氯酸25mL,用水稀释至500mL,并置于4℃冰箱中冷藏保存。4.2.910mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠400g，用水溶解并加水稀释至1000mL。1 SC/T 3048—20144.2.101mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠40g，用水溶解并加水稀释至1000mL。2mol/L磷酸二氢钾溶液：准确称取2.722g磷酸二氢钾（4.2.5），用水溶解并加水定容至1 000 mL.2mol/L磷酸氢二钾溶液：准确称取4.566g磷酸氢二钾（4.2.6)），用水溶解并加水定容至1 000 ml..4.2.13腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤标准品：纯度≥99.0%。4.2.14标准储备液：准确称取腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷各 10 mg(精确至0.00001g），用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为1.00mg/mL；准确称取次黄嘌呤5mg（精确至0.00001g），用水定容于10ml.棕色容量瓶中，此溶液浓度为0.500mg/ml。各标准储备液置于4℃冰箱中冷藏保存，保存期不超过一周。4.2.15混合标准工作溶液：取适量标准储备液，用流动相配置系列标准溶液，使腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷浓度为0.200ug/mL、0.500μg/mlL、1.00μg/ml、5.00μg/mL、15.0μg/mL、40. 0 μg/mL、100 μg/mL;使次黄嘌呤浓度为 0. 100 μg/mL、0.250 μg/mL、0. 500 μg/mL、2. 50μg/mL、7.50μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mlL;使用时现配现用。4.2.16流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（4.2.11）十0.02mol/L磷酸氢二钾溶