NYT 1690-2009香蕉种质资源离体保存技术规程.pdf

ICS 65.020.20B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1690—2009香蕉种质资源离体保存技术规程Technical regulations for invitro conservation of banana germplasm2009-05-01实施2009-03-09 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1690—2009前言本标准的附录 A 和附录 B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部农垦局提出。本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、国家重要热带作物工程技术研究中心、农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室。本标准主要起草人：李志英、徐立、马千全、黄碧兰、李克烈、陈伟。I NY/T 1690—2009香蕉种质资源离体保存技术规程1范围本标准规定了香蕉(Musa nana Lour.）种质资源离体保存技术的术语和定义、基本要求、保存技术、检验方法、技术指标等相关内容。本标准适用于香蕉种质资源的常温、低温和超低温离体保存。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。NY/T 357香蕉　组培苗3术语和定义NY/T 357中确立的及下列术语和定义适用于本标准，3. 1常温保存 normal temperature conservation在(25土2)℃下保存正常生长离体培养物的方式。3. 2低温保存low temperature conservation在(16士1)℃下通过改变培养基成分和光照条件保存缓慢生长离体培养物的方式。3.3超低温保存cryopreservation在液氮（一196℃)中保存代谢和生长几乎完全停止、生物学状态相对稳定的离体培养物的方式。4基本要求4.1用于种质资源保存的材料必须保证品种纯正，来源可靠。4.2利用聚合酶链式反应(PCR)和反转录聚合酶链式反应(RT一PCR)方法检测,确保材料不带香蕉花叶心腐病(CMV)和束顶病病毒(BBTV)。4.3种质未发生变异。4.4详细登记材料情况（见附录A)。4.4.1名称：种质名、品系名、地方名。4.4.2产地：原产地。4.4.3引种情况：来源地、引种人、原保存单位、原保存单位编号、引种时间。4.4.4种质编号：国家统一编号、引种号、采集号、保存号。4.4.5保存情况：保存材料、保存者、保存数量、继代时间、继代次数、操作人。5常温保存5.1保存材料 NY/T 1690—2009选择符合4.1、4.2和4.3的种质材料并按4.4详细登记，经表面消毒后在无菌条件下切取大小约0.5cm的生长点组织,按照常规组织培养方法进行外植体诱导、增殖（继代)培养，繁殖出的试管苗用作香蕉离体保存的材料。5.2保存容器采用规格为18mm～25mm×160mm～180mm的试管，用内置硅胶圈的密封塑料盖封口，用标签写明种质编号。5.3保存条件保存温度(25±2)℃，光照强度20 μmol/（m²·s）～30 μmol/（m²·s），光照时间8h/d～12 h/d,培养基为 MS+30g/L蔗糖十1.12mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)＋0.175mg/L α-萘乙酸(NAA),pH5.8。每管加培养基 15 mL～20 mL。5.4保存数量每份种质保存10管以上，每管1个丛芽。5.5 继代时间每2～3个月继代1次。6低温保存6.1保存材料同5.1。6.2保存容器同5.2。6.3保存数量每份种质保存10管以上，每管1个丛芽。6.4保存条件保存温度16士1℃,光照强度15 μmol/（m²·s）～20 μmol/（m²·s），光照时间12 h/d,培养基为MS＋50 g/L 蔗糖＋1mg/L6-BA＋0.1 mg/L吲哚乙酸(IAA)，pH 5.8。每管加培养基 15 mL～20mL.6.5继代时间每12～15个月继代1次。7超低温保存7.1保存材料选择符合NY/T 357规定的一级标准的组培生根瓶苗作为超低温保存材料。7.2保存数量每份种质保存10管以上，每管5～7个茎尖。7.3预培养将7.1的材料在MS十30g/L蔗糖的固体培养基上预培养，培养条件为：温度（25士2)℃，光照时间16 h/d,光照强度 40 μmol/(m²· s)～50 μmol/(m²· s),时间 30 d～45 d。7.4分离无菌茎尖选取预培养后假茎粗为 0.5 cm～0.8 cm 的健康生根植株，在无菌条件下剥取 0.8 mm～1.0mm茎尖。7.5装载将无菌棉纸(1.5