SNT 1959-2007动物源性食品中醋酸甲羟孕酮残留量的检测方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1959—2007动物源性食品中醋酸甲孕酮残留量酶联免疫法的检测方法Determination of medroxyprogesterone acetate residue in animal origin food-Enzyme linked immunosorbent assay method2008-03-01实施2007-08-06 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1959—2007言前本标准附录 A为规范性附录,附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、北京中检维康技术有限公司。本标准主要起草人：刘炬、郑文杰、贺艳、赵卫东、王雄、王莲、刘秀红。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1959—2007动物源性食品中醋酸甲羟孕酮残留量的检测方法酶联免疫法1范围本标准规定了动物源性食品中醋酸甲羟孕酮残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉等肉制品及鱼和虾等水产品中醋酸甲羟孕酮残留量的筛选检测。规范性引用文件2下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3测定方法3.1方法提要用乙酸乙酯提取样品中醋酸甲羟孕酮，用间接竞争性酶联免疫法进行检测。3.2试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.2.1 甲醇。3.2.2 乙酸乙酯。3.2.3正已烷。3.2.4无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。3.2.5针筒式微孔过滤膜（0.22μm，水性）。3.2.6醋酸甲羟孕酮酶联免疫试剂盒1。96孔板（12条×8孔）包被有醋酸甲羟孕酮和载体蛋白的复合物。抗醋酸甲羟孕酮抗体（浓缩液）：4℃保存，于使用时用抗体稀释缓冲液50倍稀释，抗体稀释8 h后不能继续使用。酶标记物（浓缩液）：辣根过氧化物酶和羊抗兔二抗的结合物，4℃保存，于使用时用酶标稀释缓冲液50倍稀释，酶标物稀释8h后不能继续使用。洗涤液（浓缩液），按附录A配制。底物液A,按附录A配制。底物液B,按附录A配制。10×浓缩抗体稀释缓冲液（pH7.2）：使用前用蒸馏水稀释10倍。按附录A配制。酶标稀释缓冲液（pH7.4）:按附录A配制。终止液:2 mol/L硫酸水溶液。1）醋酸甲羟孕酮酶联免疫吸附测定试剂盒是由中检维康技术有限公司提供的产品的商品名称。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T 1959--20073.2. 6. 10乙酸甲羟孕酮系列标准液（6个倍比稀释浓度水平，外加1个空白）。1标准品贮备液：配制成1ug/mL甲醇贮备液，4℃保存低温保存试剂，放置于室温不要超过 4 h，使用时，各溶液应达到室温。储存有效期为 1 年。3.3仪器和设备3.3.1均质器。3.3.2天平（精确到0.001g）。3.3.3组织粉碎机。3.3.4离心机。3.3.5旋涡混合器。3.3.6酶标仪。3.3.7氮吹仪。3.3.8温育培养箱（5℃～60℃）。3.3.9单道微量加样器：50μL10duL20m200可调，2001000μL可调。3.3.10多通道微量加样器：50μL毛250.L调3.4制样3.4.1样品制备取样品约500g，将其切碎后，经组织粉碎机粉碎混匀，均匀分成两份，装人洁净容器内，作为试样，密封，并标明标记。3.4.2样品保存抽样后样品应立即在－18℃以下冷冻保存0℃～5℃条件下48.h内送达实验室。在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残物含量的变化3.4.3样品提取称取 5g(精确到0.01g)粗粉碎样晟到50mL管中，加大5无水硫酸钠，再加人20ml乙酸室温下鑫000/min离心10min。取上清液4mL于40℃氮乙酯,高速均质 1 min～2 min,振荡 5^气吹干。3.4.4样品净化用1.5ml80%的甲醇/水溶残渣，加人1mL症已烷，振荡mih脱脂，离心2 min，吸去正己用2m.%的甲醇/抗体稀释缓烷，重复此步两次。在40℃氮气吹舒净液溶解残渣，将此溶液经微孔过滤膜(0.22 μm，水性)过滤，进行测定3.5酶联免疫法检测3.5.1试剂的制备乙酸甲羟孕酮抗体.根据使用需要量，量取一定用量的乙酸甲羟孕酮抗体。用稀释好的抗体缓冲液按照1：50的比例来稀释抗体浓缩液。注：在吸取