NY_T 3147-2017饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3147—2017饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定液相色谱-串联质谱法Determination of epinephrine and isoprinosine in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)2017-12-22 发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 3147—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：索德成、魏书林、王培龙、李阳、王瑞国、苏晓鸥、樊霞、李宏、周炜、冯三令。I NY/T3147—2017饲料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了饲料中肾上腺素（epinephrine）和异丙肾上腺素（isoprinosine）含量测定的液相色谱串联质谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料中肾上腺素和异丙肾上腺素的测定。肾上腺素检出限为10ug/kg，定量限为20ug/kg；异丙肾上腺素检出限为5ug/kg，定量限为10μg/ kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样经提取液提取后，用混合型阳离子固相萃取柱净化、吹干、稀释溶解，液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。4试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯试剂，实验室用水符合GB/T6682中一级水的规定。4.1甲醇：色谱纯。4.2甲酸：色谱级。4.3七氟丁酸：色谱级。4.4肾上腺素、异丙肾上腺素、肾上腺素-D6对照品：纯度≥98%。4.5试样提取液：称取1.90g焦亚硫酸钠溶液、1.86g乙二胺四乙酸二钠加入950ml.水，加50ml.乙睛混合均匀。4.63.0mmol/L七氟丁酸溶液：准确吸取七氟丁酸0.40ml，加水1000mlL，混勺。4.7试样稀释液：取乙腈10ml，加3.0mmol/L七氟丁酸溶液（4.6)100ml，混勺。4.8肾上腺素和异丙肾上腺素标准储备液：分别精密称取肾上腺素和异丙肾上腺素对照品（精确至0.00001g）至棕色容量瓶中，用甲醇（4.1）配成浓度各为1mg/ml的标准储备液，2℃～8℃冷藏保存，有效期6个月。4.9肾上腺素和异丙肾上腺素标准工作液：分别吸取肾上腺素和异丙肾上腺素标准储备液（4.8），用试样稀释液（4.7）)稀释成浓度为1ug/ml的标准工作液，2℃～8℃冷藏保存，有效期1个月。4.10肾上腺素-D6同位素内标储备溶液：分别精密称取肾上腺素-D6对照品（精确至0.00001g）至棕色容量瓶中，用甲醇（4.1)配成浓度各为1mg/ml的标准储备液，2℃～8℃冷藏保存，有效期6个月。4.11肾上腺素-D6同位素内标工作液：临用前配制，将肾上腺素-D6同位素内标储备溶液（4.10)用甲1 NY/T3147—2017醇（4.1)稀释至1μg/ml。4.12氨水甲醇溶液：取5ml氨水与95ml.甲醇混合。4.13氮气：纯度99.9%。4.14固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱（3ml，60mg），或其他性能相当的小柱。4.15滤膜：0.22um，有机系。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾电离源。5.2离心机：转速不低于8000r/min。5.33氮吹仪。5.4涡旋振荡器。5.5粉碎机。5.6恒温水浴振荡摇床。5.7固相萃取装置。5.8天平：感量0.01g；感量0.00001g。6采样和试样的制备按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装人磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取称取配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料2g（精确至0.01g)于50ml离心管中，准确加人20uI肾上腺素-D6同位素内标工作液（4.11）、20mI.试样提取液（4.5），涡旋混合30S，超声提取30min，8000r/min离心5min，上清液备用。7.2净化固相苯取小柱依次用3ml甲醇、3ml.水活化。取适量或全部上清液过柱，依次用3ml.水和2ml甲醇淋洗，抽干，用3ml氨水甲醇溶液（4.12)洗脱，收集洗脱