SN_T 3682-2013葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3682--2013葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Phoma glomerata (Corda) Wollenw. Hochapfel2013-08-30发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T3682—2013言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国新疆出人境检验检疫局。本标准主要起草人：贺艳、赵良娟、段维军、罗加凤、牛嘉慧、廖芳、赵卫东。1 SN/T3682--2013葡萄茎枯病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了葡萄茎枯病菌Phomaglomerata（Corda）WollenwHochapfel检疫鉴定的实验步骤、鉴定方法等。本标准适用于葡萄茎枯病菌寄主植物种苗中葡萄茎枯病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是在日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1126进出境木材检疫规程SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3葡萄茎枯病菌的基本信息学名:Phoma glomerata(Corda)woilenweber Hochapfel异名：Coniothyrium glomeratum CordaPhoma alternariacea BrooksSeaileAposphaeria fibricola (BERK.)SACC.有性世代学名：LeptosphaeriaslicchariBredaleHaan(尚未发现其有性型，但曾经有这个定名。）中文名称：葡萄茎枯病菌分类地位：子囊菌门（Ascomycota），子囊菌纲Ascomycetes），粪壳菌亚纲（Sordariomycetidae），间座菌目（Diaporthales），黑座蘭科（Valsacede），茎点霉属（Phbma）。传播途径：近距离传播方式为分生孢子随着风雨传播以及密植土壤中休眠的厚垣孢子。远距离传播方式为厚垣孢子随着种子、土壤和植物残渣传播。病菌在土镶中能够长期存活，当年收获遗留田间的植物残渣中的厚垣孢子等成为次年初侵染源。葡萄茎枯病菌的其他信息参见附录A。4原理病原菌的培养性状和形态学特征（见附录B)作为葡萄茎枯病菌的检疫鉴定的主要依据。5设备和试验用具5.11仪器设备体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平（感量0.01g)、高压灭菌锅。5.2试验用具放大镜、灭菌培养皿、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、棉纱、解剖刀、酒精灯、标签、载玻片、盖玻片等。1 SN/T3682—20136试验和培养基6.1试剂麦芽汁提取物、麗糖、硝酸钠（NaNO）、硫酸镁（MgSO：·7H2O）、氯化钾（KCI）、硫酸铁（FeS：7H,O)、磷酸二氢钾（KH2PO,）、磷酸氢二钾（KHPO,）、琼脂、链霉素、1.0%次氯酸钠（NaCIO）、无菌水、酒精。6.2培养基麦芽汁琼脂培养基、查氏培养基、查氏酵母膏琼脂（CYA)培养基（参见附录C)。7抽样来自疫区葡萄枯病菌寄主的原木或板材按SN/T1126进行抽样来自疫区葡萄茎枯病菌寄主的苗木按S.V/T1157进行抽样。8检验方法在葡萄上症状为枯菱，在苹果和小麦上为叶斑。实验室分离培养方法如下：将可疑的病变组织，剪成0.4cm×0.4cm小片，在1.0%的次氣酸钠溶液中消毒5min.灭菌水冲洗3次，灭菌滤纸吸于水分后，置于麦芽汁选择性培养基平板上.每Ⅲ放置3～4片.24℃培养，3d后开始观察。解剖镜下发现有菌丝长出，立即挑取菌落边缘菌丝，转人麦芽汁选择性结养基上纯化培养。7d后用显微镜观察，记录其形态特征，并测定病菌生长速度、分生孢子长度和宽度等。继续在选择性培养基上培养，13h近紫外等照射11h黑暗条件培养至10d，产生厚垣孢子后测量其大小。葡萄茎枯病葡适宜生长温度为24℃，暗培养一个星期的菌落直径为5cm～7.5cm。9·鉴定特征9.1病原菌培养性状菌落的特征为轻微算立的菌丝体。菌落颜色为浅褐色，菌丝垫颜色逐渐变暗（砖格状厚垣孢子逐增多)。在25℃下，在PDA和MEA上日生长速度为1cm/d左右，在0A上生长速度略慢为0.75cm/d。在PDA、MEA、OA上菌落均仅有轻微耸立的菌丝体，气生菌丝少稀薄.PDA上荫丝较MEA和OA上多。在3种培养基上，菌落边缘颜色均为白色，较浅，菌落中部颜色有所不同（在PDA、上·正面/反