SNT 2060-2008进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2060-2008进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法一Determination of tylosin residues in royal jelly for import and export-Enzyme-linked immunosorbent assay2008-04-29发布2008-11-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局技1015数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法SN/T 2060-2008*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. . cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16　印张1字数 23千字2008年7月第一版　2008年7月第一次印刷印数 1-2 000*书号：155066·2-18924 SN/T 2060—2008前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：施伟良、张晓峰、黎昊雁、朱振江、何永强。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2060-2008进出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法1 范围本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中泰乐菌素残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696:1987)3　方法提要本标准以酸性的庚烷磺酸钠缓冲液来提取蜂王浆中残留的泰乐菌素，沉淀王浆中蛋白后并调节pH至7.0。处理后样品中残留的泰乐菌素与酶标记泰乐菌素共同竞争结合至包被在微孔板上的绵羊抗兔抗体，通过洗涤除去未结合的泰乐菌素和酶标记泰乐菌素，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。4试剂和材料除注明外,所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。4.1泰乐菌素检测试剂盒(参见附录 A）。4.2庚烷磺酸钠缓冲液：称取 10.1 g 庚烷磺酸钠［CH（CH²）.SO:Na］,11.4 g 磷酸钠（NasPO4·12H2O)用水溶解并定容到1L,用磷酸调节pH至2.0。4.3磷酸盐缓冲液：称取磷酸钠(Na2HPO：·12H²O)34 g,用水溶解并定容到1L，调节 pH至8.0。4.4HLB小柱,Oasis(或相当产品),3 mL(60 mg)。4.5泰乐菌素标准品：纯度大于等于98%。4.6泰乐菌素标准品溶液的配制：用甲醇作为溶剂配制成400 μg/mL的储存液，于20℃条件下保存。5仪器和设备5.1 酶标仪。5.2八道移液器:10 μL～100 μL。5.3单道移液器:10 μL～100 μL,100 μL～1 000 μL 和 2 mL～10 mL。5.4混合振荡器。5.5高速低温离心机：6000r/min。5.6具塞试管:50 mL。5.7 电子天平:0.01 g～100 g。5.8 酸度计。 SN/T 2060—20086试样的制备与保存6.1试样的制备原始样品总量不得少于200g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份；冻干粉采用四分法，将样品分成两等份。分好的样品装人洁净容器，加封并做标识。6.2试样的保存将样品于20℃～—18℃条件下保存。7 分析步骤7.1提取称取2.0g蜂王浆样品，置于50mL具塞试管中,加入6ml庚烷磺酸钠缓冲液（4.2），充分振荡，15℃条件下6000r/min离心10min，取0.5mL上清液于干挣试管，加入0.5mL磷酸盐缓冲液（4.3）,混合均匀，调节pH至6.8～7.2,此溶液即可供 ELISA检测用。最后样品稀释倍数为 8。王浆冻干粉则用水以1：2比例稀,充分浸泡（2.h.以上)后，称取2.dg按照上述王浆前处理方法进行提取，最后稀释倍数为 247.2测定条件1)7.2.1操作条件24℃)进行，泰乐菌素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温所有操作应在室温下（20℃(20℃～24℃）后方可使用。7.2.2洗板条件人工洗涤次数5次以上，每次加入洗涤液量为250uL；自动洗板可以预定5次。7.2.3酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。7.3测定步骤7.3.1将测