NYT 1596-2008油菜饼粕中异硫氰酸酯的测定硫脲比色法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1596—2008油菜饼中异硫氰酸酯的测定硫脲比色法Determination of isothiocyanates in rapeseed meal--Thiourea colorimetry method2008-07-01实施2008-05-16 发布中华人民共和国农业部发布 NY/ T 1596—2008前言本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、张文、丁小霞、汪雪芳、姜俊、谢立华。I NY/T 1596—2008油菜饼粕中异硫氰酸酯的测定硫脲比色法1范围本标准规定了硫脲比色法测定油菜饼粕中异硫氰酸酯含量的方法。本标准适用于油菜饼粕中异硫氰酸酯含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB10360油料饼粕扦样法GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法(GB/T 6682—1992，eqvISO3696—1987)3原理油菜饼粕中硫代葡萄糖苷在 pH7.0缓冲溶液中,在芥子酶作用下,水解生成异硫氰酸酯,然后与80%氨乙醇作用，生成硫脲，紫外分光光度计测定235nm、245nm、255nm波长吸光值。4 试剂除特殊规定外，所有试剂均为分析纯，水为二级水。4.1 无水乙醇。4.2 氨水。4.380%氨乙醇：准确量取20mL氨水与80mL无水乙醇充分混匀。4.4 二氯甲烷。4.5pH 7.0缓冲溶液:取35mL 0.1mol/L柠檬酸(CH:O.H²O)溶液于250mL容量瓶中,加人200mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液,0.01mol/L盐酸或0.01mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0。4.6粗芥子酶：取白芥种子(72h 内发芽率大于85%,保存期不得超过 2年)粉碎,使 80%过 60 目筛，用石油醚(沸程30℃～60℃)提取其中脂肪，在通风柜中用微风吹去残留的石油醚，置于具塞玻璃瓶中4℃下保存,可在 6 周内使用。5仪器设备5.1 分析天平,感量 0.0001g。5.2样品磨。5.3旋涡混合器。5.4 离心机。5.5恒温水浴锅。5.6紫外分光光度计，备有10mm石英比色Ⅲ。5.7100uL微量进样器。1 NY/T 1596--20085.810 mL 具塞试管。5.910 mL离心管。6试样制备取样按GB10360的规定进行。将油料饼粕粉碎后，使80%能通过60目筛，（103士2)℃下干燥2 h～3 h,冷却至室温,装人样品瓶中备用。7 分析步骤准确称取0.2000g试样，加40mg粗芥子酶和2.0mLpH7.0缓冲溶液（4.5),旋涡混合器（5.3)充分混合。35℃下酶促反应2h。加2.5mL二氯甲烷(4.4)，用旋涡混合器(5.3)混合均匀，在室温下振荡0.5 h。用旋涡混合器（5.3)将水相、有机相、样品充分混合，4000 rmp/min下离心20 min。取 6mL80%氨乙醇(4.3)于具塞试管（5.8），用微量进样器（5.7)取离心管下层有机相50μL，加人到装有80%氨乙醇的具塞试管中，盖上塞。旋涡混合均匀,将具塞试管放人水浴锅（5.5）,50℃下加热0.5h,取出，冷却至室温。用紫外分光光度计（5.6），10mm石英比色皿测定光密度值，测定波长分别为235nm、245 nm、255 nm。同时测定试样空白溶液。8结果计算试样中异硫氰酸酯的含量(w)以每克干样中异硫氰酸酯的毫克数(mg/g)表示,按式(1)计算。_ O. D25 +O. D2 × 28. 5 (1)w=[O. D245 2式中:O.D235-—试样235nm处光密度值;O. D245试样 245 nm 处光密度值;O. D255——试样 255 nm 处光密度值。每个试样平行测定2次，计算算术平均值，结果保留两位小数。9精密度9.1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于10%，以大于10%的情况不超过5%为前提。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于10%，以大于10%的情况不超过5%为前提。2 8002960LIXN中华人民共和国农业行业标准油菜饼粕中异硫氰酸酯的测定硫脲比色法NY/T 1596--2008***中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼）（邮政编码：100125网址： )北京昌平环球印刷厂印刷新华书店北京发行所发行　各地新华书店经销 ***开本 880mmX1