SN_T 1961.6-2013出口食品过敏原成分检测 第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.6—2013出口食品过敏原成分检测第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分Detection of allergen components in food for export-Part 6 :Real time PCR method for detecting walnut components2013-09-16 实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局层查真# SN/T 1961.6—2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；一第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；-第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第6部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、王海艳、袁飞、吴亚君、徐宝梁、敖威华、赵治国、赵林立。 SN/T 1961.6—2013出口食品过敏原成分检测第 6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分范围1SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原胡桃成芬的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品原料或加土食品中过敏原胡桃成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3. 1过敏原　allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态饭应的抗原。3. 2胡桃walnut也称核桃属胡桃科的胡桃属，共包括 12个种。这2个种又被分为4大类，包括英国胡/核桃(English walnut,Dioscaryon)类、黑胡/核桃类(Black walnut,Rhysocaryon）、亚洲白脱奶特类（Asianbutternut,Cardiocaryon)和美洲白脱奶特类(American butternut,Trachycaryon)。3.3实时荧光 PCR real time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个 PCR扩增过程。3.4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。4　方法提要样品经研磨后,提取 DNA，以 DNA为模板,采用胡桃过敏原蛋白 Jug r2 基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原胡桃成分。1 SN/T 1961.6—20135试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1胡桃成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针名称序列来源内参照5端引物5-CCTGAGAAACGGCTACCAT-3内参照3端引物5′-CGTGTCAGGATTGGGTAAT-3′真核生物18SrRNA基因内参照探针5-{FAM)-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-{TAMRA)-3 胡桃5端引物5′-CGCGCAGAGAAAGCAGAG-3胡桃3端引物5-GACTCATGTCTCGACCTAATGCT-3胡桃过敏原蛋白 Jug r2基因胡桃探针5-FAM-TTGTGCCTCTGTTGCTCCTCTTCCC-TAMRA-35.2十六烷