NY 555-2002动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法.pdf

ICS 11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 555-—2002动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法Detection methods for coliform group,faecal coliform groupcoliform bacteria in animal products2002-08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 555—2002前言大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌是食品卫生的三项重要的卫生指标。当前国际上采用的方法有美国公职分析化学家协会（AOAC)方法及日本人介绍的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)和EC试管发酵法。为满足要求，依照日本采用的BGLB和EC试管发酵法并进行适当改进，建立了本检测方法。本方法用BGLB发酵管检测大肠菌群并计算最大可能数（MPN)值，用EC肉汤发酵管检测粪大肠菌群并计算MPN值,在检测粪大肠菌群的基础上通过生化鉴定检测大肠杆菌并计算MPN值，鉴定中省去了革兰氏染色。这些重要改进缩短了检验时间，简化了操作程序，而且经对比试验证明结果可靠，适合于动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。本标准的附录A是规范性附录,附录B是资料性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：天津动植物检疫局。本标准主要起草人：秦贞奎、张碧波、侯艳梅、杨金良、薛振源。 NY/T 555—2002动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法1范围本标准规定了动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法。本标准适用于动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准2.1大肠菌群 coliforms;coliform gronp一群能分解乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。2.2粪大肠菌群 faecal coliforms;faecal coliforms gronp44.5C发酵乳糖产气的一群细菌，是用来表示来源于粪便的大肠菌群。2.3大肠杆菌 escherichia coli;coliform bacteria符合大肠菌群和粪大肠菌群定义，用 IMViC(靛基质、甲基红、维培和西蒙氏柠檬酸盐)生化试验进一步鉴定，四种生化反应结果依次为十十一和一十一一的细菌。2. 4最大可能数most probable number,MPN采用多次稀释方法所求得的最近似数，是通过概率计算出来的。2.5 IMViC靛基质试验、甲基红试验、维培(VP)试验和枸橡酸盐利用试验的缩写。3检测方法3.1材料准备3.1.1仪器吸管，恒温水浴箱，培养箱，匀浆器，100mL、200mL和500mL三角瓶及广口瓶，直径5mm的玻璃珠。3.1.2培养基及试剂配制方法见附录A（规范性附录）。3.1.2.1煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB)，配制方法见第A.1章。3.1.2.2EC肉汤，配制方法见第A.2章。3.1.2.3伊红美蓝琼脂(EMB)，配制方法见第A.3章。3.1.2.4甲基红-维培(MR-VP)培养基，配制方法见第A.4章。3.1.2.5西蒙氏柠檬酸盐培养基，配制方法见第A.5章。1 NY/T 555--20023.1.2.6靛基质(吲哚)试验培养基，配制方法见第A.6章。3.1.2.7科瓦克(Kovacs)氏靛基质试剂，配制方法见第A.7章。3.1.2.8甲基红指示剂，配制方法见第A.8章。3.1.2.9、维培(VP)试剂，配制方法见第A.9章。3.2＇检测程序本标准的检测程序见图 1。样品制备及稀释中大肠菌群测定粪大肠菌群及大肠杆菌测定EC肉汤发酵管BGLB 发酵管37℃24 h44. 5 ℃ 1 24 h气（一)产气 (+)产气（一）产气（+)报告阴性报告阴性EMB平板EMB平板结结果果37℃|24 h37℃|24h依据典型菌落产依据典型菌落产气管数报告大肠营养琼脂平板气管数报告粪大菌群MPN值肠蘭群MPN值37℃|24 h典型菌落IMViC生化试验、乳糖发酵试验37 ℃ | 24 h核对 IMViC结果为++·-和乳糖发酵管产气-+:菌落的EC肉汤产气管数，报告大肠杆菌MPN值图 1 检测程序流程图3.3样品制备3.3.1无菌操作从动物产品中采取有代表性的样品如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检测，应将冷冻样品置于一15℃冰箱保存。非冷冻而易腐的样品，应置于 4℃冰箱保存。检测前冷冻样品可于 2℃～5℃下在18 h 内，或于45℃下在15 min 内解冻。3.3.2不同样品匀浆液的制备3.3.2.1液体样品：以无菌吸管取样25mL加人到装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠)内，制成1：10的样品匀