NY_T 3332-2018热带作物种质资源抗病性鉴定技术规程 荔枝霜疫霉病.pdf

ICS 65.020.01B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3332-2018热带作物种质资源抗病性鉴定技术规程荔枝霜疫霉病Technical code of practice of disease resistance of tropical crop germplasm-litchi downy blight2019-06-01实施2018-12-19 发布中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3332—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由农业农村部热带作物及制品标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。本标准主要起草人：张新春、孙进华、王家保。 NY/T3332—2018热带作物种质资源抗病性鉴定技术规程荔枝霜疫霉病1范围本标准规定了荔枝（LitchichinensisSonn.）种质资源抗荔枝霜疫霉病（Phytophthoralitchi）鉴定的术语和定义、抗性鉴定、抗性鉴定有效性判别、重复鉴定、抗性终评的技术要求。本标准适用于荔枝种质资源霜疫病抗性的鉴定与评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1荔枝霜疫霉病litchidownyblight由荔枝霜疫霉菌（Phytophthoralitchii)引起的一种危害荔枝叶片、花穗与果实的卵菌病害。病害症状参见附录 A。2. 2人工离体接种artificialinoculationinvitro用人工繁殖或收集的病原物，按一定量对离开树体后的接种对象接种，并模拟自然发病条件诱导接种对象发病。2. 3果实成熟适度thefruitmaturemoderate果实的发育达到该品种固有的果形大小、外观色泽和品质风味。2. 4抗性评价evaluationforresistance根据选用的技术标准判别寄主对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。3抗性鉴定3.1接种体准备3.1.1荔枝霜疫霉菌分离纯化从典型荔枝霜疫霉病病果上分离、纯化和单孢培养后鉴定为荔枝霜疫霉菌，经柯赫法则确定其具有致病力。3.1.2荔枝霜疫霉菌培养荔枝霜疫霉菌在PDA培养基上28℃恒温培养至大量产生孢子囊。3.1.3荔枝霜疫霉菌悬浮液配制接种前培养平板加人10mL无菌蒸馏水以淹没菌丝体，室温放置30min。轻轻刮起培养基上的菌丝体，同水一起转人无菌的收集瓶中。剧烈震荡收集瓶，使菌丝体分散，用1层无菌纱布过滤后收集于无菌容器中。显微镜下用血球计数法计算孢子囊浓度，配制成4×106个/mL的孢子囊悬浮液3.2鉴定材料准备3.2.1选果每个供试材料选取60个大小均匀、外观无损伤且成熟适度的果实。3.2.2清洗1 NY/T3332—2018每个供试材料的果实用2L无菌蒸馏水浸洗，自然后晾干后1h内用于接种。3.2.3对照品种以当地主栽品种作为对照品种。3.3接种3.3.1接种盒准备保鲜盒（35cm×22cm×10.5cm）底部铺3层纸巾，倒人无菌水至浸过纸面，翻转保鲜盒倒出未吸湿的水分。3.3.2接种方法将每个供试材料果实在1L孢子囊悬浮液（4×104个/mL)其中完全浸泡5min，使果实表面均匀接触到霜疫霉菌孢子囊。接种果实沥干水分后均匀间隔放置于保鲜盒纸巾上。盖上保鲜盒，28℃恒温放置。3.3.3病情调查和记载果实接种后每隔24h记录一次单个果实的发病面积百分比，并依据表1归档记录单个果的病情等级。连续观察记录到第5d。表1荔枝霜疫霉病病情等级划分标准病情等级发病面积百分比（P)，%0P=0. 0010.00P≤10.00310.00P≤33.33533.33P≤50.00750.00P≤75.009P75.003.3.4病情等级鉴定供试材料每天的病情等级按式(1)计算病情指数。FXU;DI = 100 (1)UX9式中：DI病情指数；F: -第i级病情级别(i=0、1、3、5、7、9)；U:第i级病情级别对应果实数量；U处理果实总数量；9一一最高级病情级值；-求和。3.3.5抗性水平鉴定以对照品种发病程度达到正常水平时的病情指数为依据，根据表2的抗性分级标准划分抗性水平。表2荔枝霜疫霉病抗性水平划分标准抗性水平病情指数(DI)高抗(HR)DI10. 00中抗(MR)10.00≤D25.00抗病(R)25. 00≤DI50. 00感病(S)50. 00≤D75. 00中感(MS)75. 00≤D90. 00高感(HS)DI≥90. 002 NY/T 3332—20183.3.6接种与鉴定后材料的处理将接种与鉴定后的材料做无害化处理4抗性鉴定有效性判别以对照品种发病程度明显异常时判定该实验无效，5重复鉴定鉴定品种若初次鉴定表现为抗病，后续应进行一次以上重复鉴定6抗性终评进行重复鉴定后，鉴定2