SN 1479-2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1479—2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法Inspection of malachite green residues in aquatic products for import and export2005-04-01实施2004-11-17 发布中华人民共和国发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1479—2004前言本标准的附录 A 和附录 B 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国上海出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：郭德华、叶长淋、李波、朱畅。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法范围本标准规定了进出口水产品中孔雀石绿残留量的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于进出口鱼、虾、贝、蟹中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿残留量的检验。2抽样和制样2.1检验批以不超过10000箱为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2抽样数量抽样数量见表1。表1抽样数量批量/件最低抽样数/件冷冻品活品，盐藏品150及以下90及以下3151~3 20091~50053 201~~10 000501~1201~10 0002.3抽样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件中抽取500g为原始样品，原始样品总量不少于4kg，放人清洁容器内，加封后，标明标记及时送交实验室。2.4试样制备从抽取的原始样品中取可食部分，放人高速组织捣碎机中捣碎均勾。将捣碎的样品充分混勾，分出约500g，作为试样，装人清洁容器中，标明标记。2.5试样保存将试样于一18℃以下冷冻保存。2.6警示在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3测定方法3.1方法提要试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层，最后用丙磺酸固相提取小柱净化，洗脱液用CN液相色谱柱和PbO2柱后衍生柱在可见光处测定，外标法定量。如有必要可用液相色谱-质谱/质谱法确证。3.2试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。3.2.1乙腈：液相色谱纯。1 SN/T 1479-20043.2.2 二氯甲烷。3.2.3甲醇：液相色谱纯。3.2.4醋酸盐缓冲液：溶解4.95g无水乙酸钠及0.95g一水对甲苯磺酸于900mL水中，用冰醋酸调节溶液 pH到4.5,最后用水稀释到1 L。3.2.520%（质量分数)盐酸羟胺水溶液：溶解12.5g盐酸羟胺在50mL.水中。%盐酸羟胺甲醇溶液：准确移取 1 mL 20%盐酸羟胺水溶液到100 mL容量瓶,用甲醇准确定容至刻度线。 mol/L对-甲苯磺酸:称取 17.2 g一水对-甲苯磺酸,并用水稀释至 100 mL。二甘醇。.9酸性氧化铝：80目～120目。二氧化铅。3.2. 103. 2. 11硅藻土：色谱层析级孔雀石绿标准品：纯度98%。.13孔雀石绿标准溶液：准确称取适量的孔雀石绿标准品，用甲醇配成浓度为1mg/mL的标准储备液。3.2.14隐色孔雀石绿标准品：纯度98%。3.2.15隐色孔雀石绿标准溶液：准确称取适量的隐色孔雀石绿标准品，用甲醇配成浓度为1mg/mL的标准储备液。3.2.16孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准混合溶液：准确移取适量上述两种标准储备液，用甲醇配成浓度为10μg/mL的标准混合液。3.3仪器和设备3.3.1高效液相色谱仪：配有紫外-可见光检测器。3.3.2高效液相色谱-质谱/质谱仪。3.3.3高速均质器。3.3.4 离心机:3 000 r/min。3.3.5固相萃取装置。3.3.625%PbO²氧化柱：空的不锈钢预柱管,3cm×4mm（内径），两端覆以2μm的过滤板，在抽真空的情况下,把含有25%PbO的 Celite 硅胶装柱,添加数滴甲醇后压实后旋紧。临用前用甲醇冲洗。将PbO2氧化柱连接在紫外-可见光检测器与液相色谱柱之间。3.3.7丙磺酸(RRS-SPE)固相萃取小柱:500 mg,Bond Elut LRC,或相当者。3.3.8中性氧化铝固相萃取小柱：1 g,Supeclean LC-alumina-N,或相当者。3.3.9离心管:50 ml,100 mL，具塞。3.4测定步骤3.4.1提取准确称取5.0g样品于50mL离心管内，加人1.5mL20%的盐酸羟胺水溶液、2.5mL1.0mol/L的对-甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸盐缓冲溶液，用均质机以15000r/min的速度均质30s，加人10mL乙腈后剧烈震摇30s。再加人10g酸性氧化铝，再次震荡30s。将离心管置于离心机内以3000r/min