SN 1632.1-2005奶粉中阪岐肠杆菌检验方法 第1部分：分离与计数方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1632.1—2005奶粉中阪崎肠杆菌检验方法第1部分：分离与计数方法Detection of Enterobacter sakazakii from dehydrated powdered milk-Part 1 : Isolation and enumeration2005-08-18发布2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1632. 1—2005前言SN/T1632《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》分为三个部分：第1部分：分离与计数方法；第2部分：PCR检验方法；第3部分：荧光PCR检验方法。本部分为SN/T1632的第1部分，是参考美国FDABAM婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分离计数方法(Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazaki from Dehydrated Powdered Infant Formula)方法形成。本部分的附录 A和附录B为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本部分主要起草人：罗茂凰、高旗利、张海英、张海滨、张霞、赵贵明、姚霞、顾鸣，，1 SN/T 1632. 1---2005奶粉中阪崎肠杆菌检验方法第1部分：分离与计数方法1范围SN/T1632的本部分规定了奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法。本部分适用于奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数，其他食品可参照执行。2设备和材料2.1水浴箱：保持水温45.5℃±0.2℃。2.2 温度计：量程1℃~55℃,分刻度0.1℃。2.3 培养箱:35℃～~37℃和 24℃～26℃。2.4吸管:1 mL、5 mL和 10 mL,分刻度 0.1 mL。2.5“L型玻璃涂布棒：直径 3 mm～4 mm,可涂布 45 mm～55 mm 的区域。2.6接种环:3 mm直径。2.7 天平：量程2 kg,感量 0.1 g。2.8灭菌样品处理器具：取样勺、剪刀、开罐器。2.9²样品稀释瓶：100mL、125mL、160mL、250mL和2L样品稀释瓶。2.1015 mmX150 mm 灭菌平皿。2.11阪崎肠杆菌质控菌株：ATCC 29544。2. 12API20E生化鉴定试剂盒或类似产品。2. 13VITEK 生化鉴定系统或类似设备。3 培养基和试剂3. 1胰化大豆蛋白琼脂（TSA)（见第A.1章）。3.2结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)（见第A.2章）。3.3月肠杆菌增菌肉汤（EE肉汤）（见第A.3章）。3.4显色培养基琼脂(Xα-GIcA)（见第 A.4章）。3.5氧化酶试验试剂（见附录第A.5章）。4阪崎肠杆菌检验方法4.1方法提要奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法是应用微生物检验的增菌培养、分离、生化鉴定等方法对奶粉中可能存在的阪崎肠杆菌进行定性和定量的检验。4.2检验程序阪崎肠杆菌的检验程序见图1。 SN/T 1632. 1—2005样品 100g×3,10 g×3,1 g×3加入 9 倍量的无菌蒸馏水或样品 100 g加入900 mL无菌蒸增水36±1℃18 h~22 h10 mL 加入 90 mL 肠杆菌增菌肉汤(EE 肉汤）威18 h~22 h36 ℃±1 ℃结晶紫中性红胆盐葡葡糖琼（VRBGA）平板36℃±1℃18 h~22 h18 h~22 h36℃±1 ℃显色培养基（Xα-GlcA）平板胰化大豆蛋白琼脂（TSA）平板36℃±118 h~22 h25℃±1℃48 h~72 h氧化酶试验 API 20 E 生化鉴定试剂盒、VITEK 生化鉴定系统或其他革兰氏染色1报告图 1 阪崎肠杆菌的检验程序4.3阪畸肠杆菌定量检验(MPN 法)4.3.1定量检验是应用“三管”增菌法，检验和定量样品中极少量的阪崎肠杆菌。检验需要 333 g样品。4.3.2取样前消毒样品包装的开启处和取样勺：无菌称取样品100g、10g和1g各三份分别加人2L、250mL和125mL的样品稀释瓶中，加人9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水（1：10稀释）,或者将样品直接称量到装有9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水的样品稀释瓶中，振摇使样品充分混匀，36℃士1℃培养 18 h~22 h。4.3.3分别移取培养18 h～22 h的悬液各10 mL加人 90mLEE肉汤中,36℃±1℃培养18 h～22 h。4.3.4轻轻混匀增菌液，用下列方法进行平板接种：直接涂布法：每份增菌液取0.2mL加到2个VRBGA平板或 2个 Xα-GIcA平板，每个平板0.1 mL,用无菌玻璃涂布棒涂布（如果预计奶粉中含有大量的细菌，应使用灭菌的 EE肉汤