NY_T 2897-2016饲料中β-阿朴-8-胡萝卜素醛的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2897-2016饲料中β-阿朴-8-胡萝卜素醛的测定高效液相色谱法Determination of β-apo-8-carotenal in feeds-High performance liquid chromatography2016-05-23 发布2016-10-01实施中华人民共和国农业部发布- NY/T 2897—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：华中农业大学、广州汇标检测技术中心、广州立达尔生物科技有限公司、帝斯曼（中国）有限公司。本标准主要起草人：张妮娅、齐德生、陈雷、高思1 NY/T 2897—2016饲料中β-阿朴-8-胡萝卜素醛的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中β-阿朴-8-胡萝卜素醛的高效液相色谱测定方法。本标准适用于添加剂预混合饲料、浓缩饲料及配合饲料中β-阿朴-8-胡萝卜素醛的测定。本标准的方法检出限为0.6mg/kg，定量限为2.0mg/kg。2规范性引用文件下列义件对于本义件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的义件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本义件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法GB/T20195动物饲料样品的制备3原理试样中β-阿朴-8-胡萝卜素醛经甲醇、正已烷和乙酸乙酯提取后，在氮气保护下浓缩，用流动相重溶，注入高效液相色谱仪中进行分离，紫外检测器检测，外标法测定样品中β-阿朴-8-胡萝卜素醛含量4试剂和材料除特别说明外，所有试剂均为分析纯试剂，试验用水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定。4.1甲醇。4.2饱和氯化钠溶液：将氯化钠逐步加人100ml.水中，搅拌，直至氯化钠不再溶解，上清液即为饱和氯化钠溶液。4.3正已烷。4.4乙酸乙酯。4.5冰乙酸。4.6无水乙醇。4.7甲基叔丁基醚。4.8乙酸溶液（0.05%）：取0.5ml冰乙酸于1L容量瓶中，用水定容。4.9提取剂：将甲醇、乙酸乙酯、正已烷按照体积比为1：1：1混合均勺。4.10甲基叔丁基醚一甲醇(1十1)溶液：将甲基叔丁基醚和甲醇按照体积比为1：1混合均匀。4.11β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准品（含量大于96%）。4.12β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准储备液：称取β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准品0.05g（精确至0.0001g）.用甲基叔丁基醚一甲醇溶液（4.10）溶解，转人100ml.棕色容量瓶中.定容至刻度.配制成浓度为500mg/I的β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准储备液。4℃下避光保存，有效期为6个月。4.13β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准工作液：取β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准储备液（4.12）.用甲基叔丁基醚-甲醇溶液（4.10)逐级稀释成浓度为0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml.、8.0μg/ml.的系列标准工作液。1 NY/T 2897—20165仪器5.1分析天平：感量0.0001g。5.2高效液相色谱仪：配有紫外检测器。5.3氮吹仪。5.40.45μm微孔滤膜。6试样的采集与制备按GB/T14699.1采集有代表性的样品，用四分法缩减取样。按GB/T20195制备样品，粉碎过0.45mm孔径的试验筛.混合均匀，装人密闭容器中，低温保存备用。7分析步骤7.1试样溶液的制备称取试样0.5g～2.0g（m），精确到0.0001g，于事先加入10mL水的锥形瓶中，再分别加入饱和氯化钠溶液（4.2）2.0mL、0.05%乙酸溶液（4.8）10.0ml，摇勺，用提取剂（4.9）萃取3次，每次15ml将上层萃取液合并后，加入2.0mL无水乙醇（4.6），于30℃下氮气吹干。用甲基叔丁基醚-甲醇溶液（4.10）4.0mL（V,）溶解残余物，通过0.45um微孔滤膜过滤，制成试样溶液。以上操作均在避光通风柜内进行。试样溶液避光冷藏，24h内完成上机测定。7.2测定7.2.1色谱参考条件色谱柱：C30柱.长250mm，内径4.6mm.粒度5.0μm；流动相：A相为甲醇、水、三.乙胺混合溶液（90十10十0.1）.B相为甲基叔丁基醚-甲醇-水-三.乙胺混合溶液（90十6十4十0.1）；梯度洗脱程序：按表1执行；进样量：20uL；流速：1ml/min;检测波长：462nm；柱温：35℃。表1流动相梯度洗脱程序B. %A.%时间.min093. 56. 53493. 56. 5010034. 105010050.193.56. 57.2.2标准工作曲线的绘制分