SN_T 2670-2010番茄环斑病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2670—2010番茄环斑病毒检疫鉴定方法Quarantine identification of tomato ringspot virus2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T2670—2010前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈红运、邓丛良、陈青、赵文军、黄文胜、廖富荣、林石明、朱水芳 SN/T2670—2010番茄环斑病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了番茄环斑病毒检疫鉴定方法本标准适用于可能携带番茄环斑病毒的进境种子、苗木、组培苗等繁殖材料的检疫与鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1860植物病毒免疫电镜检测方法SN/T2122i进出境植物及植物产品检疫抽样3原理3.1:学名与分类地位学名：tomatoringspotvirus缩写：ToRSV分类地位：豆花叶病毒科（Comoviridae）；线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。其他资料参见附录A。3.2粒体形态番茄环斑病毒粒体为等轴对称二十面体，直径28nm。3.3基因组基因组由两条单链正义RNA组成,RNA1为8.2kb,RNA2为7.3kb。多个分离物的基因组已被测序，各分离物之间序列同源性较低，根据依赖于RNA的RNA聚合酶编码区序列设计PCR引物可检测烟草株系（Tobacco strain）、桃黄芽花叶株系（Peachyellowbud mosaic strain）、葡萄黄脉株系（Grapeyellowveinstrain)及多个ToRSV分离物。4仪器设备、用具及试剂4.1仪器设备酶联检测仪、天平（感量，1/10000g）、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、组织捣碎机、恒温水浴、低温冰箱等。4.2用具微量移液器（2.5μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL）、酶联板、研钵等。1 SN/T2670—20104.3试剂酶联免疫吸附测定试剂(见附录B)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测试剂（见附录C)。5样品制备5.1种子抽样按照SN/T2122的规定执行。将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子)播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。5.2苗木按SN/T2122规定抽样。将苗木种植于隔离温室中，于25℃生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状的分组检测，分组方法同5.1。6检测方法6.1.酶联免疫吸附测定见附录B。S6.2RT-PCR检测见附录C。6.3免疫电镜检测按照SN/T1860的规定执行6.4生物学测定参见附录D。7结果判定6.1、6.2和6.3中的两种方法检测结果为阳性，即可判定检出番茄环斑病毒。酶联测定为阳性后，RT-PCR或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定，并进行复验。8样品保存8.1样品保存经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存，种子保存在4℃，病株在一20℃或者一80℃冰箱中保存，做好标记和登记工作。2 SN/T2670—20108.2结果记录与资料保存完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联极反应的原始数据，RT-PCR检测需有电泳结果图片，生物学测定需有鉴别寄主的症状照片，电镜观察需有病毒粒体照片。3 SN/T 2670—2010附录A（资料性附录）番茄环斑病毒相关资料A.1寄主范围ToRSV的自然寄主有天竺葵属（Pelargoniumspp.）、悬钩子属（Rubusspp.）、李属（Prunus spp.）和烟草（Nicotianatabacum）等。在人工接种的情况下还可以侵染茄科、藜科、葫芦科、蔷薇科和豆科的100多种植物。2病害症状A.2ToRSV主要侵染多年生植物，在桃和其他李属植物上表现黄芽花叶症状；桃、樱桃和一些李属植物上表现茎部蚀损斑和退化症状；李树被ToRSV侵染后产生褐色线条；ToRSV侵染苹果树后嫁接部位上方膨大，接穗和砧木连接处的树皮异常增厚并呈海绵状，剖开树皮后可发现明显的坏死线，苹果树也可出现衰退症状；ToRSV在红树莓（redraspberry)上表现环斑和衰退症状；葡萄等多种