SNT 1944-2007动物及其制品中细菌耐药性的测定 纸片扩散法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1944—2007动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法Detection of antimicrobial resistance of the bacteria in animal and animal products-Disk diffusion testing2007-08-06 发布2008-03-01实施中华人民共和国发布经 190 高美 国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1944—2007前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C为规范性附录,附录 D和附录 E为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：韩伟、顾鸣、肖云民、江蕙琪。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1944—2007动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法 范围本标准规定了动物及其制品中细菌耐药性的纸片扩散检测方法。本标准适用于动物及其制品中分离的大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌耐药性的检测，其他动物源性细菌的耐药性测定可参考使用本标准。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标摊的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)修订版均不适用于本标准，然而，数励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 4789.1食品卫生微生物学检验　总则GB/T4789.6食品卫生微生物享检验致泻大肠埃希氏菌检验GB/T4789.10食品卫生微生物学检验、金黄色葡萄球菌检验GB/T 4789.28　食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN0170出口食品沙门民菌属（包括亚利桑那菌)检验方法术语和定义下列术语和定义适用于本标准3. 1 antimicrobi,l resistance细菌耐药性细菌与抗生素反复接触后对药物的敏感性逐渐减弱，甚至能撼抗抗生素而不被抑制和杀灭，细菌的这种特性称为耐药性。通常通过药物敏感性试验（antimidrobial susceptibility testing，AST)进行测定,其结果用敏感(S)、中介(I和耐药(R)来表示。3. 2敏感susceptible(S)被测细菌的生长繁殖，用常规剂量的抗生素即可抑制3.3中介 intermediate(I)被测细菌对常规剂量的抗生素的反应率较敏感菌株低,其生长繁殖可被高于常规剂量的抗生素浓度抑制。3. 4耐药 resistant(R)被测细菌的生长繁殖不能被常规剂量的抗生素所抑制。3.5纸片扩散法 disk diffusion testing也称 Kindy-Bauer(KB)法,是一种定性药物敏感性试验方法。将含一定量的抗菌药物的纸片贴在已接种一定量的待测细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现抑菌环，以通过测量其大小来判I SN/T 1944--2007定该细菌对该药物的敏感性,是细菌耐药性检测与监测中最常用的方法。47样品的采集按GB/T4789.1规定执行。5测定方法5.1方法原理将干燥的含有一定浓度抗菌药物的滤纸片贴在已接种一定量的待测细菌的琼脂平板上。经培养后，由于抗菌药物向培养基的扩散,抑制一定距离范围内细菌的生长，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌环。测量抑菌环的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。5.2试剂和材料5.2.1培养基和试剂耐药性测定用的培养基和试剂见附录 A。缓冲蛋白陈水(BPW)按照 GB/T 4789.28配制。5.2.2质控菌株大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25 922。大肠杆菌（Escherichiacoli）ATCC35218（仅用于β内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合药物的质控）。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 25 923。5.2.3灭菌棉拭子及纱布。5.2.4定性滤纸:直径6.00 mm～6.35mm;厚度0.7mm～0.8 mm;单片质量大于 6.0 mg。5.2.5各种抗生素标准品及相应溶剂：标准品的保存应符合其贮存条件，青霉素类抗生素应现配现用。5.2.6商品化抗生素药物纸片，药物含量与 CLSI标准一致。5.3仪器和设备5.3.1培养箱：35℃士1℃。5.3.2恒温摇床：35℃±1℃。烤箱：120℃。.4高压灭菌锅：121℃±1℃。5.3.5pH计:精度士0.1。5.3.6冰箱:0℃～4℃；一18℃以下。5.3.7打孔器:孔径6.00 mm～6.35mm。5.3.8微加样器：10 μL,20 μL。5.3.9微生物实验室通用玻璃器Ⅲ、移液管、培养皿血等。5.3.10冷冻干燥机。McF