SN_T 4876.3-2017DNA条形码方法 第3部分：检疫性卷蛾.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4876.3-2017DNA条形码方法第3部分：检疫性卷蛾Method for DNA barcodeg-Part 3:Quarantine species of Tortricidae2017-11-07发布2018-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局O刮涂层查真伤 SN/T4876.3—2017前 言SN/T4876《DNA条形码方法》共分为5个部分：第1部分：检疫性乳白蚁；一第2部分：检疫性断眼天牛；第3部分：检疫性卷蛾；1第4部分：检疫性高梁属；一第5部分：曼陀罗属。本部分为SN/T4876的第3部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本部分主要起草人：钱路、安榆林、徐淼锋、李艳华、叶兼菱、廖力、张卫东、徐梅、梁照文、李健、汤晓军、伏建国。 SN/T4876.3-2017DNA条形码方法第3部分：检疫性卷蛾1范围SN/T4876的本部分规定了我国检疫性卷蛾的DNA条形码检测鉴定方法。本部分适用于我国进境植物检疫性卷蛾DNA条形码的测定、结果的比对分析与判定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1DNA条形码DNAbarcodes一段短的、标准化的基因片段，用于区分不同的物种。该片段在种间存在明显的遗传变异和分化并容易进行PCR扩增。DNA条形码技术主要用于物种识别和新种发现。3.2凭证标本VoucherspecimensDNA条形码的实物参考凭证，凭证标本信息包括馆藏信息、采集信息、鉴定信息，用于复核。模式标本是用于分类学研究的凭证标本。3.3Co I基因 coI gene线粒体基因组的蛋白质编码基因，全称为细胞色素c氧化酶亚基I（cytochromecoxidasesubunitI），由于该基因进化速率较快，常用于分析亲缘关系密切的种、亚种及地理种群之间的系统关系。4检疫性卷蛾基本信息中文名：卷蛾学名：Tortricidae英文名：LeafrollerMoths,TortricidMoths中国进境植物检疫性卷蛾包括11种：黑头长翅卷蛾Aclerisvariana（Fernald，1886）、荷兰石竹卷蛾Cacoecimorphapronubana（Hubner，1800)、云杉色卷蛾Choristoneurafumiferana（Clemens，1865）、苹果异形小卷蛾Thaumatotibia（Cryptophlebia）leucotreta（Meyrick，1913）、斜纹卷蛾Ctenopseustisobliquana（Walker，1863）、山楂小卷蛾Cydia janthinana（Duponchel，1835）、樱小卷蛾Grapholita1 SN/T4876.3—2017(Cydia）packardiCydia packardi（Zeller，1875)、苹果蛾Cydia pomonella（Linnaeus，1758)）、杏小卷蛾Grapholita（Cydia）prunivora（Walsh，1868）、梨小卷蛾Cydiapyrivora（Danilevsky，1947）、葡萄花翅小卷蛾Lobesia botrana（Denis et Schiffermuller，1775）。目前全世界已定名的卷蛾科种类有9800余种。卷蛾科种类寄主范围广泛，大部分为重要害虫，其幼虫常对农林生产造成严重的经济损失。55方法原理根据卷蛾的COI序列特征，应用DNA条形码技术对检疫性卷蛾进行鉴定。6仪器设备、用具及试剂6.1仪器设备与用具常规PCR仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶成像系统、酸度计、测序仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、解剖镜、天平（感量1/10000）、勾浆研磨器、摇床、水浴锅、制冰机、纯水仪、旋涡震荡器、-70℃冰箱、冰箱、微量移液器（0.5μL，2μL，10μL，20μL，100μL，200μ，1000μL）、PCR管(0.2 mL,0.5 mL)。6.2主要试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682要求。提取液A（1%SDS，50mmol/LTris·Cl，25mmol/LNaCl，25mmol/LEDTA）、提取液B（3mm