SNT 2497.16-2010进出口危险化学品安全试验方法 第16部分：Western-Blot实验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.16—2010进出口危险化学品安全试验方法第 16 部分：Western-Blot 实验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 16: WesternBlot2010-09-16实施2010-03-02发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局设码防 SN/T 2497.16-—2010前創言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第 16 部分：Western-Blot 实验;第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第 19 部分:Northern Blot 实验;第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21 部分:琼脂糖凝胶电泳试验;第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26.部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T 2497系列标准的第16部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、于艳军、赵好力宝、王华、熊中强。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 2497.16—2010进出口危险化学品安全试验方法第 16 部分：Western-Blot 实验范围SN/T 2497 的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中 Western-Blot 实验的术语和定义、主要试剂、试验步骤和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品安全试验Western-Blot实验。2 术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1Western-Blot般称为免疫着色或免疫印迹，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。2.2第一抗体first antibody以待测蛋白质作为抗原的对应抗体。2.3第二抗体 second antibody以碱性磷酸酶标记的，能够与第一抗体结合的抗体。3 试剂3.1转移缓冲液称取甘氨酸2.9g,Tris碱5.8g，十二烷基磺酸钠(SDS)0.37g,加适量水使固体溶解后，加人甲醇200 mL,补水至 1 000 mL。3.210×丽春红S贮存液称取丽春红S2g，三氯乙酸30g,磺基水杨酸30g，加水溶解，定容至100mL，室温保存，用时稀释10倍。3.3TBS 溶液称取 Tris 碱 3g、NaCl8 g 和 0.2 g KCl,加水溶解后,用稀盐酸调 pH 值至 7.4,定容至 1000 mL，在1.034X105Pa(15 lbf/in²)高压下蒸汽灭菌 20 min，室温保存。3.4TBST 溶液在 TBS中按1：1000 加人 Tween 20,室温保存。3.5碱性磷酸酶缓冲液100 mmol/L Tris · Cl(pH 值 9.5),100 mmol/L MgCl²,100 mmol/L NaCl,室温保存。3.6氮蓝四唑(NBT)贮存液0.5g NBT 溶于 10 mL 70%二甲基甲酰胺(DMF)中。3.75-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)贮存液0.5g BCIP 溶于 10 mL二甲基甲酰胺(DMF)中。 SN/T 2497.16—20103.8磷酸盐缓冲液(PBS)称取 8g NaCI、0.2 g KCI、1.44 g Naz HPO4 和 0.24 g KH,PO4,溶于 800 mL蒸馏水中,用 HCI 调节 pH值至 7.4,定容至 1000 mL，1.034×105Pa（151bf/in²）高压下蒸汽灭菌20min，室温保存。4 试验步骤4.1 聚丙烯酰胺凝胶的准备将进行完 SDS-聚丙