SN 1159-2002椰子红环腐线虫检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1159--2002植物检疫椰子红环腐线虫检疫鉴定方法Plant quarantine--Methods for inspection and identification ofBursaphelenchus cocophilus (Cobb, 1919) Baujard2002-11-25发布2003-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1159--2002前A本标准的附录A、附录B为资料性附录，附录C为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。本标准起草人：李伟东、杨祖江、张宁、林萍。I SN/T 1159—2002植物检疫椰子红环腐线虫检疫鉴定方法1 范围本标准规定了植物检疫中椰子红环腐线虫的检疫鉴定方法。本标推适用于植物检疫中棕榈科植物（包括种果、苗木等繁殖材料）子红环线虫的检疫和鉴定。2 原理椰子红环腐线虫（Bursaphelenchus cocophilus（Cobb,1919）Baujard 1989)属线虫门（Nematoda)，侧尾腺纲(Secernentea），滑刃目（Aphelenchida），滑刃科（Aphelenchoididae），伞滑刃属（Bursaphelenchus)。系~种移居性内寄生线虫。侵入后，在树干皮层下的薄壁组织内取食和繁殖，然后进人茎的内部组织，并在中柱的外层扩散。在子树的根、茎、叶柄的组织内也能发现各龄期的幼虫。椰子红环腐线虫的寄主（参见附录A）、地理分布（参见附录B）、生物学特性、传播途径和形态学特征为制定检疫鉴定方法提供了依据。3仪器用具实验需要以下仪器：a)显微镜；b)体视解剖镜；c)玻璃漏斗（直径10 cm～20 cm）;d)铁架；e)线虫滤纸；f)钢制筛盆(筛孔直径为0.2 cm～0.5 cm);g)水浴锅；h)斧头;i)锯子。4化学试剂福尔马林（40%甲醛）、三羟基乙酰胺、蒸馏水，TAF固定液（福尔马林：三羟基乙酰胺：蒸馏水=7 : 2 : 91)5现场检疫5.1现场检查查验待检的棕榈科植物材料的有关单证，核实产地、包装、唛头、品种和数量。逐件检查棕榈科植物繁殖材料的种果、苗木等是否有可疑疫情。对于来自椰子红环腐线虫发生区域的材料，还应仔细检查装载运输工具和包装材料。然后，直接扦取有可疑症状的植物材料；如果没有发现任何可疑症状，则按下述比例扦取样品。1 SN/T 1159--20025.2抽样5.2.1种果的抽样500粒以下取1份；501粒～2000粒取2份；2001粒～5000粒取3份；5001粒～10000粒取4份；10001粒以上每增加10000粒增取1份样品，不足10000粒的余量，计取1份样品。每份样品为20粒。5.2.2苗木的抽样50株以下抽取5株；50株～200株抽取10株；201株～1000株抽取15株；1001株～5000株抽取20株；5000株以上每增加5000株增取5株，不足5000株的余量，计取5株样品。5.3土壤的收集小心收集植物材料上粘附的土壤，并注意收集包装内外散落的土壤。5.4栽培介质的收集收集植物材料上的裁培介质。6 实验室检验6. 1 外观症状的检查仔细检查叶片有无发生黄化、枯死、叶片变小硬化，用斧头和锯子横切植株茎干，检查有无变色组织或变色环；检查椰果外壳及其他棕榈科植物有无变色腐烂组织；纵切植株茎于和根部，特别关注是否有虫隧道及象甲等昆虫幼虫与成虫。该病的症状为植株茎干表层下出现条坏死组织带，带宽约3crm，横切树干后，其横断面上会有砖红色或褐红色组织环带，叶柄和根的横断面有相同症状；染病树现黄化，通常是较低部的叶片，从羽叶的先端开始，进而向叶基部扩展，接着变褐色。被线虫侵染的根系由白色变为黄色、粉红色、暗黄色或红棕色，病根的皮层脱落。该线虫还引起椰子树和油棕的小叶病，症状表现为叶片变小、僵硬、直立；羽叶短、铁丝状和末端坏死；叶基部和叶柄出现栓化斑块，较老的叶片变成黄色至灰色。6.2 线虫的分离6.2.1从植物组织中分离线虫将植株材料（茎干、根部、叶柄及果实)切成片状，大小约2cm×2cm×0.5cm的小片，用浅盆-漏斗法进行分离。选用玻璃斗，下面接一段乳胶管，乳胶管上装一个止水夹，在溺斗中装满蒸馏水，将漏斗置于铁架上。将切好的植物组织铺放在有一层纱布加线虫滤纸的筛盘中，然后把筛盘放入装满水的漏斗中，筛盘直径比斗直径小2cm～3cm，深度为3cm。在25℃～27℃下，浸泡12h～24h后，用小培养Ⅲ或试管接在乳胶管下，松开止水夹，小心收集线虫悬浮液。6.2.2从介体昆虫中分离线虫将象甲等昆虫成虫，幼虫置于盛有50mL水的小烧杯中漂洗2h后，取出研碎，再将研碎后的材料用纱布包好，用浅盆