SN_T 4537.1-2016商品化试剂盒检测方法 氯霉素 方法一.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4537.1—2016商品化试剂盒检测方法氯霉素方法一Commercial kit method-Chloramphenicol---Test method I2016-08-23发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局李聘 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准商品化试剂盒检测方法氯霉素‧方法一SN/T 4537.1—2016*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16　印张0.5字数10千字2017年12月第-次印刷2017年12月第一版印数 1--500*书号：155066·2-32436 SN/T 4537.1—2016前言本部分是SN/T4537系列标准的第1部分。本部分按照GB/T1.1--2009 给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京勤邦生物技术有限公司。本部分主要起草人：邹明强、薛强、王燕飞、万宇平、罗晓琴。I SN/T 4537.1—2016商品化试剂盒检测方法氯霉素方法一1 范围SN/T4537的本部分规定了食品中氯霉素酶联免疫检测方法。本部分适用于采用酶联免疫竞争法定性定量检测鸡肉与虾肉中的氯霉素。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法3原理在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样品中残留的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氯霉素酶结合物，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中氯霉素的含量。4试剂与材料4.1氯霉素酶联免疫检测试剂盒在2℃～8℃条件下运输与保存,产品有效期12个月。本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价结果参见附录A。试剂盒组成如下：a）96孔酶标板×1块，包被有偶联抗原；b）标准液×6瓶，1mL/瓶，浓度分别为0×10-90.025×10-9,0.075×109,0.3×10-9，1.2×10-9,4.8X10-9;c）高浓度标准品：1mL/瓶，浓度为100×10-9；d)酶结合物工作液，7 mL；e)底物液A液,7 mL;f)底物液B液,7 mL;g）终止液,7 mL;h）20×浓缩洗涤液，40 mL;i):2×浓缩复溶液,50 mL。4.2乙酸乙酯（分析纯)4.3正已烷（分析纯）4.4　去离子水1 SN/T 4537.1--20165仪器与设备5.1微孔板酶标仪450nm/630nm。5.2旋转蒸发仪/氮气吹干装置。5.3均质器。5.4振荡器。5.5涡旋仪。5.6 离心机。5.7天平：感量0.01g。5.8刻度移液管：10 mL。5.9洗耳球。5.10玻璃试管：10 mL。5.11聚苯乙烯离心管:10 mL、15mL、50 mL。微量移液器:20 μL～200 μL、100 μL～1 000 μL。5.126　样品制备6.1用均质器均质组织样本。6.2称取3.0 s士0.05g均质物至 50mL聚苯乙烯离心管中，加人6 mL乙酸乙酯，用振荡器振荡5 min,3 000g 以上，,室温(20 ℃～25℃)离心5 min。6.3移取 4 mL 上层有机相（约相当于 2 g 的样本)至 10 mI 干净玻璃试管中,于 50 ℃～60℃水浴氮气流下吹干。6.4加入1mL正已烷，用涡旋仪涡动1min，再加1mL复溶工作液（见配液1），用涡旋仪涡动15s，3 000g 以上,室温(20 ℃～25℃)离心5 min。6.5除去上层有机相,取下层50 μL用于分析。7 分析步骤7.1将所需试剂从置于室温(20℃～25℃）平衡 30 min 以上，液体试剂使用前摇匀。7.2取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放人自封袋，保存于2℃～8℃。7.3洗涤工作液在使用前也需回温。7.4编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。7.5加标准品/样本：加标准品/样本50μL到对应的微孔中。7.6加人酶结合物：加人酶结合物工作液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应 30 min。7.7洗板：揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤 4次～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪