SN 1221-2003鸡传染性支气管炎抗体检测方法 琼脂免疫扩散试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1221--2003鸡传染性支气管炎抗体检测方法琼脂免疫扩散试验Detection of antibodies against avian infectious bronchitis virus--Protocol of agar gel immunodiffusion test2003-12-01实施2003-05-28发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1221-2003前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：梁亚德、刘志光、杨宝华。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1221—2003鸡传染性支气管炎抗体检测方法琼脂免疫扩散试验1 范围本标准规定了应用琼脂免疫扩散试验检测鸡传染性支气管炎抗体的方法。本标准适用于鸡传染性支气管炎抗体的检测及对该病的诊断、检疫和疫情监测等。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682—一1992分析实验室用水规格及试验方法3缩略语下列缩略语适用于本标准。3.1OIE office international des epizooties国际动物卫生组织3. 2IBavianinfectious bronchitis鸡传染性支气管炎3. 3IBVavianinfectious bronchitis virus鸡传染性支气管炎病毒4试验方法4.1原理琼脂是一种含有硫酸基的多糖物质，高温时能溶于水,冷却后凝固,形成凝胶,琼脂凝胶呈多孔结构，其孔径大小取决于琼脂凝胶的浓度。1%琼脂凝胶的孔径约 85 nm，这一孔径范围能允许各种抗原抗体分子在琼脂凝胶中自由扩散，并由近及远形成浓度梯度，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。抗原抗体反应形成的沉淀因其颗粒较大，故在凝胶中不再扩散，而形成沉淀带。根据有无沉淀带的形成判断是否存在相应的抗原抗体免疫反应，从而判断样品中是否存在相应的抗体或抗原。4.2仪器与试验准备4. 2.1标准抗原和标准阳性血清标准抗原和 IBV标准阳性血清由 OIE参考实验室或指定单位提供。4.2.2琼脂糖凝胶板的制备用1.5mol/L氯化钠(NaCl)溶液配置 0.9%～1%琼脂糖，隔水煮沸溶解或高压溶解,冷却至55℃左右取 15 mL 倒人直径为 9 cm 平血制作琼脂糖凝胶板,琼脂糖凝胶厚度约 2 mm,冷却后备用。4.2.3仪器一天平(0.001 g);一恒温水浴锅；1 SN/T 1221—2003-琼脂糖凝胶打孔器；一微量取样器。4.2.4采血无菌条件下从鸡只的翅静脉采血 2 mL左右。4.2.5分离血清静止血样，待血液凝固后，取上部血清液体，经56℃水浴灭活30min后待检。4.3操作步骤4.3.1打孔取琼脂糖凝胶板，用梅花状琼脂糖凝胶打孔器打孔，孔径5mm、孔距3mm。打孔结束后将平板底，部经过酒精灯火焰上方，来回5次～7次封底（适用于玻璃平皿）。4.3.2加样用微量取样器在中间孔加人IBV标准抗原，第1、4孔分别加人标准阳性血清，第2、3、5、6孔分别加人被检血,均加满为止，如图1所示：-被检血清标准抗原~标准阳性血清图 1加样完毕后,将琼脂板放在盒内，置 37℃放置 24h～48 h。4.4结果判定在标准阳性血清孔与标准抗原孔中间形成一条清晰、致密的沉淀线时才能进行结果判定。观察时可借助8W日光灯，在黑色背景判定。4.4.1阳性被检血清孔与标准抗原孔之间形成致密沉淀线，并与阳性对照沉淀线平滑相连，即可判为阳性。4.4.2可疑如沉淀线不清晰或只出现阳性对照沉淀线与被检血清打弯时，判为可疑，应予重检，重检结果相同应判为阳性。4.4.3阴性被检血清孔与标准抗原孔之间无沉淀线出现者为阴性。出现的沉淀线与阳性对照沉淀线交叉或不相连时,为非特异性反应,判为阴性。2 L/NS中华人民共和国出人境检验检疫行业标准鸡传染性支气管炎抗体检测方法琼脂免疫扩散试验SN/T 1221—2003中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标推出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16　印张1/2　字数7千字2003年9月第一版　2003年9月第一次印刷印数 1—2 000*书号：155066·2-15300网址 版权专有侵权必究举报电话：（010N/T1221-2003