SYT 0532-1993油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法.pdf

SY中华人民共和国石油天然气行业标准SY/T0532——93油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法1994-01-06发布1994-06-01实施发布中国石油天然气总公司 中华人民共和国石油天然气行业标准SY/T0532-93油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法1主题内容与适用范围本标准规定了油田注入水中细菌分析的术语、方法原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、细菌计数方法、精密度和分析结果。本标准适用于油田注入水中腐生菌、硫酸盐还原菌、铁细菌的分析。油田其他水中细菌分析可参照执行。2引用标准SY5329碎屑岩油藏注水水质推荐指标及分析方法。3术语干热灭菌：将待灭菌的物品放入烘箱中，逐渐升温至140～160C，维持2～3h，达到灭菌目的。湿热灭菌：将培养基和其他不宜干热灭菌的物品放入高压灭菌锅内，加热，使锅内蒸汽压力达0.1MPa，持续20～30min，达到灭菌目的。4方法原理腐生菌、硫酸盐还原菌和铁细菌的测定均采用绝迹稀释法。即将待测定的水样逐级注入到测试瓶或试管中进行接种稀释，直到最后··个测试瓶或试管中无菌生长为，然后根据细菌生长情况和稀释倍数，计第出水样中细菌的数目。5试剂和材料a.化学试剂（均为分析纯）：乳酸钠、硫酸钠、氯化钙、硫酸业铁铵、磷酸二氢钾、氢氧化钠、氯化钠、氯化铵、硫酸镁、硫酸铵、硝酸钠、柠檬酸铁铵、磷酸氢二钾。b.酒精溶液：浓度为75%。c.生物试剂：牛肉膏、蛋白陈、酵诗膏、葡萄糖；d、材料：纱布、脱脂棉、牛皮纸、线绳、00号胶塞、6号针头。仪器和设备6a.电热恒温培养箱：使用温度30～60C土1C；b.电热鼓风干燥箱：使用温度30~300C±5C；c.高压灭菌锅；d.托盘天平：最大称量100g，感量0.1g3e.冰箱：f.酸度计：刻度为0.1pH单位g.电炉：1000~2000W;h.烧杯：100，500，1000m1中国石油天然气总公司1994-01-06批准1994-06-01实施1 SY/T0532-93i.三角瓶：500，1000ml，j.量筒：250，500ml；k，试管：150mm×15mm若干个；1.移液管：1m1;m.酒精灯；n，注射器：1ml;0.细口瓶：125ml；P.硫酸盐还原菌测试瓶、腐生菌测试瓶、铁细菌测试瓶。7采样7.1采集的水样应具有代表性，防止细菌污染。7.2将细口瓶刷洗干净后用牛皮纸将瓶口包好。进行下热或湿热灭菌。7.3取样前将取样阀打开使水以5～61/min的流速畅流3min后，用已灭菌的细口瓶取样至瓶口，加塞。7.4从取样到检测样品的时间，不得超过24h。7.5采样后随即贴上标签，注明取样日期、时间、地点、取样条件及取样人。8分析步骤8.1测试瓶法8.1.1根据水样中腐生菌、硫酸盐还原菌、铁细菌的多少，将数个装有相应菌类培养基的测试瓶排成一组并依次编上序号。8.1.2用75%的酒精溶液将测试瓶顶盖及操作者的手进行消毒。8.1.3用无菌注射器吸取1m1水样注入到1号瓶内，摇匀。8.1.4另取-→支无菌注射器，从1号瓶中吸取1m1液体注入到2号瓶中，摇匀。8.1.5重复上述操作程序，根据含菌量多少稀释到最后所需浓度。放入30～37℃C恒温箱中培养。腐生菌培养5～7d，测试瓶中液体由红色变为黄色或混浊，即表示有腐生菌生长。硫酸盐还原菌培养14～21d，测试瓶中液体变为黑色，即表示有硫酸盐还原菌生长。铁细菌培养7～14d，测试瓶中液体产生混浊或红棕色胶状物，即表示有铁细菌生长。8.2液体试管法8.2.1无菌水及生理盐水的配制8.2.1.1无菌水：取经干热或湿热灭菌的试管（或三角瓶）若于个，各加入蒸馏水9m1，塞上：棉塞用牛皮纸包好，进行湿热灭菌。8.2.1.2生理盐水：称取0.85g氮化钠，溶解于-100m1蒸馏水中，取若干个试管或三角瓶，各加入生理盐水9m1，进行湿热灭菌。8.2.2无菌操作技术及接种方法将灭菌的培养基试管以及稀释水样用的无菌水或无菌生理盐水放入无菌室，打开紫外灯，灭菌30min。关闭紫外灯，带进水样，用75%酒精棉球擦手，点燃酒精灯，左手拿菌种试管，将棉塞用右手转松动，以利于接种时拔开，右手拿移液管，在近火焰处将移液管仲入试管内，送入水样后，立即塞上棉塞。8.2.3水样的稀释8.2.3.1用无菌的移液管吸取1m1水样，放到1号无菌水或生理盐水管中，摇勾，得到稀释度为101的水样。2 SY/T0532-938.2.3.2另取一支无菌的移液管从1号管中吸取1m1水样放到2号管中，得到稀释度为10-2的水样，依次类推直到稀释到所需浓度为止。8.2.4培养基的配制8.2.4.1腐生菌培养基牛肉膏3.0g蛋白陈5.0g氯化钠（NaC1)5.0g将上述试剂放入烧杯中，加入1000m1蒸馏水，溶解后用10%氢氧化钠溶液调整pH值至7.4～7.6，分装于试管中，每管5m1，塞