SN_T 2847-2011水貂阿留申病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2847—2011水貂阿留申病检疫技术规范Quarantine protocol for aleutian disease of mink2011-02-25 发布2011-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局KDY SN/T 2847—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中国农业科学院特产研究所。本标准主要起草人：王伟利、孟庆峰、柏亚铎、肖成蕊、孟日增、石建平、姜焱、宋战昀、闫喜军、刘和平、罗雁非、王振国。 SN/T 2847—2011水貂阿留申病检疫技术规范1范围本标准规定了水貂阿留申病的检疫技术规范，包括病原分离鉴定、对流免疫电泳、PCR及荧光PCR等鉴别诊断技术。本标准适用于进出境水貂的阿留申病检疫、疫情监测和流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法临床诊断33.1概况水貂阿留申病(aleutian disease,AD)又称浆细胞增多症，是二种由主要侵害水貂免疫细胞的阿留申病毒（aleutian disease virus，ADV)引起的，导致自身免疫系统紊乱并逐渐衰竭，同时并发强烈的自身免疫的慢性传染性疾病。3. 2 发病症状病貂精神沉郁，嗜睡，渴欲猛增，常在水槽中暴饮，食欲时好时坏;贫血，抓捕时齿龈易出血，可视黏膜苍白，口腔黏膜、齿龈和软聘上出现出血和溃疡；排煤焦样便，多死于尿毒症，进行性消瘦，生长缓慢，营养不良，体重减轻。病程数周、数月不等。个别貂具有神经症状，表现抽搐、痉挛、步态螨珊,共济失调或后肢麻痹等症状。3.3病理变化血液变化主要表现在浆细胞增多和血清丙种球蛋白量增加。丙种球蛋白可从正常貂的1g/100mL血清,增至4g/100mL～5g/100 mL。病理剖检变化死貂尸体高度消瘦，多数病例有腹水，表现肝变性或不同程度的肿胀，质地增厚、淤血、呈红褐色，实质内有小坏死灶；肾肿大，充血，表面散在斑点状出血，高低不平，肾小球的基膜模糊不清，出现萎缩；脾和淋巴结显著肿大，呈暗红色；心脏扩张;肺气肿、有出血点;脑膜充血。3.4 流行病学病貂和隐性感染水貂是本病的传染源，病毒通过粪便、唾液、尿液等途径排除和扩散，通过消化道、呼吸道感染，也可通过胎盘直接传染给后代。本病常年流行，没有年龄、性别的明显区别，成年水貂感染率高于育成水貂，新生仔兽感染率较低，随着月龄逐日增加，该病对母貂危害更大，病貂几乎均以死亡告终。秋、冬交际变冷的季节，感染水貂的发病率和死亡率明显高于其他季节。由于本病在临床上主要是经过缓慢,呈隐性感染较多,临床症状不典型,且易与其他疾病相混淆,根据本病在流行病学、症状和病理变化只能作出初步诊断。进一步确诊须通过实验室检查。 SN/T 2847---20114 病原分离鉴定4.1仪器、试剂与材料4.1.1仪器生物安全柜、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、高速冷冻离心机、组织匀浆器。移液器［移液器(200 μL～1 000 μL、20 μL～200 μL)、吸管(5 mL、10 mL)]细胞培养瓶。4.1.2材料与试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682分析实验室用水规格。培养液、维持液、胰蛋白酶溶液（配制方法见A.1A.5）、新生特牛血清、青霉素、链霉素。4.1.3细胞猫肾传代细胞（CRFK）。4.2 病料采集与处理4.2.1组织脏器的采集与处理无菌取病貂的肝、肾、脾、肠细膜淋巴结等组织脏器各2g，按1：10的比例用不含犊牛血清的DMEM培养液制成匀浆，反复冻融三次，3000r/min离心30min，取上清液经0.22μm 微孔滤膜过滤，加人抗菌素至终浓度为青霉素 200 IU/mL，链霉素 200 ug/mL，冷藏备用。4.2.2粪便、尿、血清及全血样品采集与处理取粪便2g,按1：10的比例用不含犊牛血清的DMEM培养液制成悬液，然后12000r/min，离心30 min取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，加入抗菌素至终浓度为青霉素2000IU/mL，链霉素2 000 μg/mL,冷藏备用。取尿液样品5mL，12000r/min离心30min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，加人抗菌素至终浓度为青霉素 2 000 IU/mL,链霉素 2 000 μg/mL，冷藏备用。无菌采取发病动物全血5mL,加入柠檬酸钠抗凝剂，冷藏备用。无