NY_T 2060.2-2011辣椒抗病性鉴定技术规程 第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2060.2-2011辣椒抗病性鉴定技术规程第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程Rules for evaluation of pepper for resistance to diseases-Part 2 : Rule for evaluation of pepper for resistance to bacterial wilt2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2060.2—2011前言NY/T2060《辣椒抗病性鉴定技术规程》分为5个部分：第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程；一第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程；一第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程；-第4部分：辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程；-第5部分：辣椒抗南方根结线虫病鉴定技术规程。本部分为NY/T2060的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本部分由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467)归口。本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本部分主要起草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、龚慧芝、振川、陈国华。 NY/T2060.2—2011辣椒抗病性鉴定技术规程第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程1范围本部分规定了辣椒抗青枯病鉴定的术语和定义、接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价以及鉴定记载表格。本部分适用于各种辣椒（CapsicumannuumL.）资源对疫病抗性的室内鉴定及评价。2术语和定义NY/T1858.4-2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。2. 1辣椒青枯病pepperbacterialwilt由青枯雷尔氏菌RaLstoniasolanacearum（Smith）Yabuuchietal.引起的发病初期顶端叶片中午萎，早晚恢复，随后下、中部叶片调萎，数天后整株急剧萎，但叶片仍为绿色，呈现青枯症状；病株的茎基部及根部维管束变褐等症状的辣椒土传病害。3青枯病菌接种体制备3.1病原物分离从发病植株病部的褐色维管束组织中，用常规稀释分离法或平板划线分离法分离青枯病病原物。分离物经寄主范围、培养性状、生理生化反应和形态学鉴定确认为青枯雷尔氏菌后，再进行分离物纯化和致病性测定，并保存备用。3.2生理小种鉴定对用于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种的鉴定，鉴定方法参见附录A中A.2。3.3接种体繁殖和保存3.3.1接种体的繁殖将保存在灭菌蒸馏水中的青枯菌落摇匀，挑取一接种环菌液在TTC培养基平板上划线，30℃培养36h～48h后，选取较大、白边较宽、中央粉红色、似有流动感的菌落（毒性菌落)转移到葡萄糖蛋白陈液体培养基中，在同样温度下振荡培育16h，加适量无菌水配成接种悬浮液。葡萄糖蛋白陈液体培养基的制备：葡萄糖5g，蛋白陈10g，水解酪蛋白1g，蒸馏水1000mL，酸碱度调节到pH7.2，高压灭菌（121℃，20min）。TTC固体培养基的制备：在葡萄糖蛋白陈液体培养基配制中增加琼脂18g，并在培养基灭菌后冷却至55℃时，加过滤灭菌的1%的2，3，5-三苯基氯化四氮唑水溶液，使终浓度为0.005%，摇匀。3.3.2病原物保存将TTC固体培养基斜面上的新鲜青枯病菌用灭菌蒸馏水洗下，或者挑取菌落放人灭菌蒸馏水中，在室温下保存。4室内抗性鉴定4.1鉴定室1 NY/T2060.2-—2011人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4.2鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗。4.3鉴定对照材料设Narval辣椒或博辣6号为抗病对照品种，茄门甜椒为感病对照品种。4.4鉴定材料育苗鉴定种子在10%的次氯酸钠溶液中浸种5min~10min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃催芽，播种于育苗钵内。育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1)，经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）。在日光温室里育苗，室内温度为20℃～25℃。幼苗应生长健壮、一致。4.5接种4.5.1接种时期接种时期为5片～6片真叶期。4.5.2接种浓度约108个cfu/mL(OD60o=0.2）。4.5.3接种方法接种采用伤根灌注接种法。接种前在幼苗-一侧距根1cm处用刀片斜插入土壤造成伤根，在伤根处每株灌注10mL接种悬浮液。4.5.4接种后管理接种后将植株置于白天28℃～32℃、夜间22℃～24℃，土壤湿度85%～94%的鉴定室内，每天光照12h～14h，光照强度20klx，保持土壤湿度近饱和状态。5病情调查5.1调查时间接种后8d10d调查病情。5.2病情级别划分幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1。表1辣椒