SN_T 1675-2014真鲷虹彩病毒病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1675—2014代替SN/T1675—2011真鲷虹彩病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for red sea bream iridovirus disease(RSIVD)2014-07-14发布2015-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准真鲷虹彩病毒病检疫技术规范SN/T1675--2014*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×1230）1/16印张1字数24千字2015年12月第一版2015年12月第一次印刷印数1—1100*定价18.00元书号：155066·2-29363 SN/T1675—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则进行起草。本标准修改采用了世界动物卫生组织（OIE)《水生动物疾病诊断手册》（2012年版，第2.3.07章）。本标准与OIE方法相比，主要区别如下：删除了电子显微镜镜检内容；删除了OIE手册中真鲷虹彩病毒病预防和控制内容；-删除了OIE手册中关于流行病学内容。本标准代替SN/T1675一2011《真鲷虹彩病毒病检疫技术规范》。本标准与SN/T1675—2011相比，主要技术差异如下：删除了电子显微镜镜检内容；规范性附录中增加了文件中所使用的主要试剂及配方；-重新编排了格式。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：兰文升、吴文忠、王津津、于力、郑小聪、贾鹏、刘、史秀杰、何俊强、叶亦优、王红英、郑腾。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T1675-—2005SN/T1675—2011。I SN/T1675—2014真鲷虹彩病毒病检疫技术规范范围本标准规定了真鲷虹彩病毒病（Red sea bream iridovirus disease,RSIVD)临床诊断、病原分离、聚合酶链式反应、间接免疫荧光实验的检测方法。本标准适用于水生动物真鲷虹彩病毒病的诊断、监测和检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出入境动物检疫采样3概述真鲷虹彩病毒病是引起养殖海水鱼类的重要疾病，引起多种海水鱼类发病，被列人世界动物卫生组织(OIE)水生动物疫病名录。RSIVD的典型性特征为脾肾肿大(参见附录A)。4缩略语下列缩略语适用于本文件。CPE：细胞病变效应（cytopathiceffect）IFAT：间接免疫荧光抗体试验（indirectfluorescentantibodytest)ISKNV：传染性脾肾坏死病毒（infectiousspleenandkidneynecrosisvirus）PCR：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)RSIVD：真鲷虹彩病毒病(red sea bream iridoviral disease)RSIV：真鲷虹彩病毒（red seabreamiridoviralvirus）HE染色法：苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining）5．仪器和设备5.1超净工作台。5.2生化培养箱。5.3荧光倒置显微镜。5.4PCR仪。5.5冷冻离心机。5.6凝胶成像仪。 SN/T.1675—20145.7DNA电泳系统。6试剂和材料6.1石鲈鳍细胞系（Grunt fin cell line，GF)6.2RSIV参考株：由指定单位提供。6.3细胞生长液：含10%胎牛血清的L-15细胞培养液（含Eagles平衡盐溶液）。6.4胎牛血清(FBS)。6.5抗RSIV的单克隆抗体：由指定单位提供，6.6异硫氰酸荧光素（FITC)标记的抗小鼠的抗体。6.7PCR反应相关试剂。6.8引物:.1-F:5-CTC AAA CAC TCT GGC TCA TC-31-R:5-GCA CCA ACA CAT CTC CTA. TC-3扩增片段长度为：570bp。:4-F:5-CGG GGG CAA TGA CGA CTA CA-34-R:5-CCG CCT GTG CCT TTT CTG GA-3*扩增片段长度为：568bp。7抽样抽样数量及方式根据GB/T18088进行。样品包括活的、发病的、濒死的鱼，取其脾和肾用于检测。以