NY_T 3321-2018饲料中L-肉碱的测定.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3321—2018饲料中L一肉碱的测定Determination of L-Carnitine in feeds2019-06-01实施2018-12-19 发布中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3321—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：索德成、张苏、田静、魏书林、王瑞国、赵根龙、王石、樊霞 NY/T 3321—2018饲料中L-肉碱的测定1范围本标准规定了配合饲料、添加剂预混合饲料、浓缩饲料中L-肉碱的方法。本标准中第一法离子色谱法适用于添加剂预混合饲料、浓缩饲料中L-肉碱的测定；第二法液相色谱-串联质谱法适用于配合饲料、浓缩饲料中L-肉碱的测定。本标准定量限：离子色谱法为50mg/kg、液相色谱-串联质谱法为1mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3 第一法 离子色谱法(IC)3.1原理试样中的L-肉碱用水直接提取，离心、过膜后，去适量体积或适度稀释，用离子色谱分离测定，外标法定量。3.2试剂或材料除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682中一级水。3.2.1甲磺酸：色谱纯。3.2.2盐酸溶液[c(HCl)=0.1mol/L]:取9mL盐酸于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度3.2.3L-肉碱盐酸盐标准品：纯度应大于98%。3.2.4L-肉碱盐酸盐标准储备液：准确称取0.1g(精确至0.0001g)于105℃干燥恒重的L-肉碱盐酸盐标准品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。该标准溶液的浓度为1mg/mL。2℃～8℃冷藏保存，有效期12个月。3.2.5L-肉碱盐酸盐标准工作液：精密量取适量L-肉碱盐酸盐标准储备液（3.2.4）置于棕色容量瓶中,用水稀释成浓度为 2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/ mL 的 L-肉碱盐酸盐对照品工作液。2℃～8℃冷藏保存，有效期3个月。3.2.6流动相(1.5mmol/L甲磺酸水溶液：乙腈=90：10)：称取2.88g甲磺酸（精确至0.01g），用水定容至1000mL，该溶液浓度为30mmol/L。取50mL该溶液，加入100mL乙腈，用水定容至1 000 mL.3.3仪器设备3.3.1离子色谱仪，带有电导检测器。3.3.2天平：感量0.0001g和0.01g各一台。3.3.3离心机：转速大于5000r/min。3.3.4超声波提取器。3.3.5滤膜：0.45μm，水系。1 NY/T 3321—20183.4样品按GB/T14699.1的规定采集样品。选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195的规定制备样品。3.5试验步骤3.5.1提取称取预混合饲料试样2g（精确至0.01g），置于100mL容量瓶中，加人80mL水，混合后置于振荡器上剧烈振荡或超声提取30min，静置10min，定容，离心或过滤，用水稀释使其浓度在2ug/mL～100μg/mL,过0.45μm滤膜，上机测定。3.5.2测定色谱条件色谱柱：非抑制型阳离子交换分离柱（长250mm，内径4mm)或性能相当的其他分析柱。流速：1.0mL/min。柱温：40℃。进样量：25uL。检测器：电导检测器。测定待IC分析仪基线平稳后，连续注人L-肉碱标准溶液，直至得到峰面积能够重现的色谱峰，依次注入标准、试样溶液，以色谱峰的保留时间定性、峰面积积分值定量，用标准系列进行单点或多点校准。样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，3.6试验数据处理试样中L-肉碱含量以质量分数X：表示，单位为毫克每千克（mg/kg），按式（1)和式（2)计算。x, = CXVXnX1000 0. 815(1)mX 1000式中：C;试样溶液中L-肉碱浓度，单点校准时由式（2)计算得到，多点校准时从标准曲线查得，单位为微克每毫升（μg/mL）；V试样的提取液总体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数；nm试样的质量，单位为克（g）；0.815-L-肉碱与L-肉碱盐酸盐的换算关系。C X A.C = (2)As式中：C混合标准工作液中L-肉碱浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；A,-试样溶液中L-肉