SNT 1812-2006禾草猩黑粉菌、剪股颖猩黑粉菌、黑麦草猩黑粉菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1812—2006禾草腥黑粉菌、剪股颖腥黑粉菌、黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法Identification of Tilletia fusca Ellis Everhart, Tilletia sphaerococca(Wallroth) Fischer y Waldheim and Tilletia lolii Auerswald ex Winter2006-08-28 发布2007-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局教码防行 SN/T 1812—2006前言本标准的附录 A、附录 B及附录 C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：罗加凤、黄国明、崔铁军、刘跃庭、廖芳。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1812--2006禾草腥黑粉菌、剪股颖腥黑粉菌、黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了进境植物检疫中宋草腥黑粉菌（Tilletia fusca）、剪股颖腥黑粉菌（Tilletia sphaero-cocca）、黑麦草腥黑粉菌（Tilletia lolii)的检疫鉴定方法。本标推适用于雀麦属、羊茅属、早熟禾属及其他禾草腥黑粉菌寄主草种中禾草黑粉菌;剪股颖属草种中剪股颖腥黑粉菌和黑麦草属草种中黑麦草腥黑粉菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标。GB/T18085--2000小麦矮化腥黑粉菌检疫鉴定方法3原理禾草腥黑粉菌 Tilletia fusca Ellis Everhart、剪股颖腥黑粉菌 Tilletia sphaerococca（Wallroth)Fischer v Waldheim、黑麦草黑粉菌 Tilletia loli Auerswald ex Winter 同属担子菌亚门 Basidiomy-cotina,冬孢菌纲 Teliomycetes，黑粉菌目 Ustilaginales，腥黑粉菌科 Tilletiaceae，腥黑粉菌属 Tilletia。被侵染的植株结实时，种子被病菌冬孢子侵占，形成菌瘘。病菌随种子远距离传播。病原菌冬孢子形态学特征及萌发生理学特性，是鉴定此三种腥黑粉菌的主要依据。主要分布区参见附录 A、附录 B和附录 C。4仪器设备多功能显微镜、体视显微镜、低速离心机往复式振荡器、涡旋振荡器、干热灭菌器、高压灭菌器、普通天平（感量1/100g）生物安全柜或超净台、生物培养箱（具光照，低温可调至5℃）、可调微量加样器(5μL～200μL）、三角瓶（250mL）、离心管、载玻片（长×宽为254mm×76.2mm，厚0.8mm）、盖玻片(18 mmX18 mm）、Parafilm膜或铝铂纸、白瓷盘、Eppendorf 管1.5mL）、培养m。5 药品试剂次氯酸钠溶液或漂白粉精片（化学纯）、吐温-20（Tween-20）、席尔氏浮载剂（见GB/T18085--2000附录A席尔氏浮载剂配制方法）、琼脂粉、无荧光显微镜物镜镜头浸泡油（Na1.516)）、封片剂。6实验室检验6.1样品制备样品接收后在样品预备室内将原始样品在样品袋内充分混匀，制成平均样品。从平均样品中称取50g作为试验样品。6.2洗涤检验6.2.1洗涤离心试验样品倒人灭菌三角瓶内，加蒸馏水 100 mL,再加吐温一20 1滴～2滴，用铝铂纸或 Parafilm膜1 SN/T 1812—2006封住三角烧瓶瓶口。将三角瓶放在往复式振荡器上振荡5min，立即将洗涤液注人离心管内，以1000 r/min离心5min，倾去上清液，再加人剩余洗涤悬浮液，离心，直至所有洗涤悬浮液离心完毕，留沉淀物。6.2.2定容在沉淀物中加人席尔氏浮载剂使之悬浮，视沉淀物多少定容至1 mL～3 mL。6.2.3镜检用微量加样器吸取沉淀物悬浮液至载片上，加盖玻片制片。制片用沉淀物悬浮液的量以加盖片后悬浮液不外溢为宜。在显微镜下镜检，检查是否有表面呈网状的腥黑粉病菌冬孢子。每份试验样品的离心沉淀物至少检查5张玻片，每片按视野依次全部检查。6.3菌瘦检查镜检发现有孢壁纹饰网眼状的腥黑粉病菌冬孢子，挑菌瘦。将取走试验样品和保存样品的剩余样品倒人灭菌白瓷盘内，在充足光线下仔细检查有无菌瘦。受腥黑粉病菌侵染的种子被病菌粉状冬孢子代替而成为菌瘦，菌瘦较健康种子粗短、饱满，外被一层薄且易碎寄主果皮，暗灰色、褐色或黑褐色，冬孢子堆深褐色或黑褐色。禾草腥黑粉菌菌瘦和黑麦草