SN_T 4419.11-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第11部分：羽扇豆.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.112016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第11部分：羽扇豆Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 11 : Lupin2016-03-09发布2016-10-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局1副涂层查真伪 SN/T 4419.11—2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成：第1部分：开心果；第2部分：腰果；第3部分：胡桃；-第4部分：榛果；第5部分：杏仁；第6部分：扁桃仁；第7部分：巴西坚果；第8部分：澳洲坚果；第9部分：栗子；第10部分：大豆；第11部分：羽扇豆；第12部分：花生；第13部分：葵花籽；第14部分：芝麻；第15部分：大麦；第16部分：小麦；第17部分：荞麦；第18部分：芥末；第19部分：胡萝卜；第20部分：芹菜；第21部分：牛奶；第22部分：虾。本部分为SN/T4419的第11部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、广州迪澳生物技术有限公司。本部分主要起草人：张舒亚、张坤、高宏伟、印丽萍、黄文胜、陈颖、曹际娟、曾静、石磊。1 SN/T 4419.11—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第11部分：羽扇豆1范围SN/T4419的本部分规定了出口食品中过敏原羽扇豆成分的环介导等温扩增（LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原羽扇豆成分的定性检测。本部分所规定的最低检测限（LOD)为0.1%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1961.17—2013出口食品过敏原成分检测第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2羽扇豆lupin属豆科（Leguminosae）羽扇豆属（Lupinus），主要栽培种有白花羽扇豆（L.albus）、黄花羽扇豆（L.luteus）等。3.22缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate）LAMP：环介导等温扩增(loop-mediated isothermalamplification)TritonX-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定1 SN/T 4419.11—20165方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用羽扇豆16SrRNA和18SrRNA内部转录间隔区（ITS1)基因特异性检测引物进行LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原羽扇豆成分6LAMP检测方法6.1原理根据羽扇豆ITS1基因序列设计特异性内引物和外引物各一对，特异性识别靶序列上的6个独立区域。在链置换型DNA聚合酶的作用下，内引物与模板DNA退火、延伸，并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区，游离的内引物合成链折叠成茎环结构，以自身为模板，启动链置换扩增循环，合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加人显色液，即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的Mg2+结合，形成焦磷酸镁乳白色沉淀，故也可通过反应液的浊度变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBRGreenI是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色荧光的染料。在游离状态下，SYBRGreenI发出微弱的荧光，但一旦与dsDNA结合后，荧光大大增强。因此：SYBRGreenI荧光的强度与dsDNA的量正相关，可以根据LAMP反应液的荧光强度测定反应体系中的dsDNA的量。6.2仪器和设备6.2.1水浴锅或加热模板：65℃±1℃和80℃±1℃。6.2.2离心管：0.1mL、1.5mL。6.2.3计时器。6.2.4移液枪:量程0.5μL～1