SN_T 4032-2014进出口化妆品中弗氏柠檬酸杆菌检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4032—2014进出口化妆品中弗氏柠檬酸杆菌检测方法Determination of Citrobacter freundii in cosmetics for import and export2015-05-01实施2014-11-19 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局P网w462151 涂层查真伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准进出口化妆品中弗氏柠檬酸杆菌检测方法SN/T 4032-2014*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：(010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16　印张1　字数 27千字2016年1月第一版　2016年1月第一次印刷印数 1—1100*书号：155066·2-29273 SN/T 4032—2014前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王小玉、游淑珠、李碧霞、唐食明、冯家望、成晓维。1 SN/T 4032—2014进出口化妆品中弗氏柠檬酸杆菌检测方法1范围本标准规定了化妆品中弗氏柠檬酸杆菌的检测方法。本标准适用于各类型化妆品中弗氏柠檬酸杆菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T7918.1　化妆品微生物标准检验方法　总则SN/T 1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3培养基和试剂除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合相关要求。为保证培养基的质量，宜按照SN/T1538.1和SN/T1538.2对培养基进行质量控制，也可使用符合SN/T1538质量要求的商品化培养基。3.1生理盐水：见 A.1。3.2灭菌液体石蜡。3.33灭菌吐温 80。3.4大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐温80(SCDILP)液体培养基：见 A.2。3.5亚硫酸铋(BS)琼脂：见 A.3。3.6 SS琼脂:见 A.4。氧化酶试剂或试纸条：见A.5。3.7革兰氏染色液：见A.6。3.89三糖铁(TSI)琼脂：见 A.7。3.9胰酪陈大豆琼脂（TSA）:见 A.8。3.10月ONPG培养基：见 A.9。3.11缓冲葡萄糖蛋白陈水：见A.10。3.12糖发酵生化鉴定管：见A.11。3.13赖氨酸铁琼脂（LIA)：见 A.12。3.14动力吲哚鸟氨酸(MIO)培养基：见A.13。3.154设备和材料4.1 天平:感量 0.1 g。1 SN/T 4032—20144.2高压灭菌器。4.3旋涡混勾振荡器4.4三角瓶：250 mL,带盖或塞。4.5试管：带盖或塞。4.6无菌吸管或移液器和配套吸头：1mL、5mL及10mL。4.7无菌器具：镊子、剪刀、小刀和药匙。4.8培养Ⅲ：已灭菌,直径 90 mm～100 mm。4.9接种针、接种环。4.10载玻片、盖玻片。4.11研钵或均质器。4.12恒温培养箱:36℃士1℃。5检验程序化妆品中弗氏柠檬酸杆菌的检验程序见图1。检样10g+90mL灭菌生理盐水90 mL SCDLP增菌[36 ℃±1 ℃,24 hBS琼脂和SS琼脂氧化酶试验、革兰氏染色试验TSI试验ONPG试验、VP试验糖发酶试验赖氨酸脱羧酶试验、动力吲哚鸟氨酸报告结果图 1化妆品中弗氏柠檬酸杆菌的检验程序 SN/T 4032—20146样品制备化妆品中不同类型的检样采用GB/T7918.1中的方法制备成1：10的样品稀释液。7 检验步骤7.1增菌取1：10样品稀释液10mL接种到90mL SCDLP液体培养基中,置 36℃士1℃培养18 h～24h。7.2分离培养自上述培养液中，取1～2接种环，划线接种子 BS琼脂和 SS琼脂平板,BS琼脂平板置36℃土1℃培养40h～48h,SS琼脂平板置36℃士1℃培养18h～24 h。弗氏柠檬酸杆菌在BS琼脂平板上为棕绿色或棕黑色菌落，在SS琼脂平板菌落呈圆形，粉红色、黑色、无色菌落，或粉红色、黑色中心菌落。从BS琼脂和 SS琼脂平板上分别挑取 3～5个可疑菌落,在 TSA琼脂上进行纯化培养。7.3鉴定7.3.1氧化酶试验取可疑菌落接种于TSA36℃士1.℃培养18h～24h，进行氧化酶试验，弗氏柠檬酸杆菌氧化酶试验为阴性。7.3.2革兰氏染色将可疑菌落