SN_T 0177-2011出口食品中产气荚膜梭状芽胞杆菌计数方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0177--2011代替SN 0177--1992出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法Method for enumeration of clostridium perfringens in food for export2012-04-01实施2011-09-09 发布63中华人民共和国3X发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 0177--2011前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替S出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌检验方法》。本标准与 SN比，主要技术变化如下：变更为推荐性标准；检测方法部分参考了ISO7937：2004《食品和动物饲料微生物产气荚膜梭状芽孢杆菌计数菌落计数技术》内容，在标准中增加乳糖-亚硫酸盐试验作为确证试验，减除了含卵黄的TSC琼脂和PY培养基的使用；补充了商品化的全自动微生物鉴定仪，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：顾鸣、韩伟、谢小珏、王赢、陈立。1 SN/T 0177—-2011出口食品中产气英膜梭状芽孢杆菌计数方法1范围本标准规定了出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌（Clostridium perfringens）的计数检验方法。本标准适用于出口食品中产气英膜梭状芽孢杆菌的检验2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1538.1培养基制备指南第1部分，实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1产气英膜梭状芽孢杆菌 clostridium berfringen在特定的选择性培养基上，细菌菌落生长垦现黑色特点（亚梳酸盐降解为硫化物而形成黑色沉淀物，并使菌落呈现黑色），分解乳糖产酸产气，48H/内能液化明胶的细菌。4设备和材料4.1无菌吸管：1.0mL和10%QmL,分刻度分别为d1mL和1.0mL。4.2无菌培养皿:直径 90 mm4.3均质器及均质袋（或均质杯）。4.4恒温培养箱或厌氧培养箱：37℃士0.5℃。4.5恒温水浴锅：46℃±0.5℃。4.6厌氧发生装置。4.7放大镜和(或)菌落计数器。4.8光学显微镜10×～100×。4.9 冰箱:2℃～8℃。4.10天平:感量0.1 g。全自动微生物鉴定系统VITEK compactl）。4.111）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1 SN/T 0177—20115 培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的分析实验室用水。5.1亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂(SC)：见 A.1。5.2液体硫乙醇酸盐培养基：见 A.2。5.33乳糖亚硫酸盐培养基(LS)：见 A.3。5.4缓冲动力-硝酸盐培养基：见 A.4。5.5亚硝酸盐检测试剂：见 A.5。5.6 锌粉。5.7乳糖-明胶培养基:见 A.6。5.8蛋白陈水:见 A.7。5.9VITEK ２ANI生化鉴定卡²）。6 检验程序产气荚膜梭状芽孢杆菌检验程序见图1。检样25g(或25mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个到3个适宜连续稀释度的样品匀液，取1mL接种SC琼脂计数黑色菌落动力-硝酸盐试验LS培养基VITEK compact乳糖-明胶试验计算产气荚膜梭状芽孢杆菌数报告图1产气英膜梭状芽孢杆菌的检验程序2）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2 SN/T 0177—20117 操作步骤7.1样品的稀释7.1.1无菌操作称取检样25g（mL)放人无菌均质器或均质袋中，加入225mL蛋白陈水，均质，制成1：10样品匀液。7.1.2吸取1：10样品匀液1 mL,加人到9 mL蛋白陈水中，混合均匀，制成1：100样品匀液。必要时，按此法将样品作进一步的10倍递增稀释。7.2 接种与培养7.2.1选择2个～3个适宜稀释度的样品勾液（液体样品可包括原液），每个稀释度分别吸取1ml.样品勾液加人到两个无菌平Ⅲ内。7.2.2将 10 mL～15mL维持在 44℃～47℃的 SC琼脂倾注平皿,转动平血使其混合均匀。待培养基凝固后,再覆盖上 10 mL S