SN 1145-2002苜蓿黄萎病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1145—2002植物检疫首黄萎病菌检疫鉴定方法Plant quarantine-Methods for inspection and identification ofalfalfa wilt (Verticillium albo-atrum Reinke Berthold)2002-11-25发布2003-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1145--2002前言本标准在制定过程中，经过调查研究、分析有关资料，根据首黄菱病菌的生物学特性、病理学原理确定各项技术指标。本标准给出了首黄萎病菌的症状特征、病原菌形态学特征以及致病性测定，三者需结合起来作为鉴定依据。本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标推由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局，本标准主要起草人：章桂明、王颖、王伍、黄佩卿、程颖慧。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。I SN/T 1145—2002植物检疫首黄萎病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了植物检疫中苗黄萎病菌的检疫和鉴定方法。本标推适用于首，包括种子、苔种苗以及苣黄萎病菌其他寄主中苣黄菱病菌的检疫和鉴定方法。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1轮状分生孢子梗verticillate conidiaphora轮枝菌的分生孢子梗类型，在直立的分生孢子梗每节基部膨大处轮生若干个小梗，可以有1轮～5轮。2. 2厚垣孢子chlamydospore由菌丝个别细胞膨大形成，具有厚壁和浓缩的原生质，可抵抗高温、低溫、干旱、营养短缺等不良的环境条件的一种休眠孢子。2. 3微菌核microsclerotium暗褐色或黑色近球形坚硬的休眠体，是单菌丝体不断芽殖聚集而来。2. 4休眠菌丝体resting mycelium休眠体，呈暗褐色或黑色，分隔规则，隔膜闻膨大，呈念珠状，3原理首黄菱病菌(Verticillium albo-atrum reinke berthold)是首上的一种危险性有害生物。苗黄菱病菌属真菌界（Fungi），半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲（Hyphomycetes），丝孢目（Hyphomycetales），丛梗孢料（Moniliaceae），轮枝孢属（Verticillium）。该病菌的为害症状、形态学特征与其他病原菌(包括其他轮枝菌)不同，是鉴定该病菌的依据。4仪器设备4.1仪器4.1.1实体显微镜4.1.2生物显微镜4.1.3电子分析天平（感量1/10000）4.1.4普通天平(感量1/100)1 SN/T 1145 --20024.1.5超净工作台4.1.6生化培养箱4.1.7光照培养箱4.1.8高压灭菌锅4.2实验用具4.2.1培养Ⅲ、塑料培养Ⅲ(9 cm)4.2.2三角瓶(250 ml.)试管(12 mm)4.2.3烧杯(100 mL、1 000 mI).5手术刀4.2.6手术剪镊子4.2.74. 2. 8载玻片(25.3 mm×76.2 mm)4. 2. 9 盖玻片(18 mmX18 mm)4.2.10量简(500 mL)吸管4. 2. 114.2.12酒精灯4.2.13滤纸 pHit.15塑料袋5 药品5.1梅干煎汁5.2酵母没膏5.3乳糖5.4葡萄糖5.5 琼脂6 取样与现场检查6.1首种子的取样按以下要求随机取样带回实验室检验：1.5 kg～10 kg取1 份;11 kg～100 kg取 2份;101 kg～~500 kg取3份;501 kg～1 000 kg取 4份。每份样品的重量为1.5kg。1.5kg以下全部取样。6.2首种苗、植株的取样按以下标准随机取样：50株以下取1份；51株～200株取2份；201株～1000株取3份；1001株～5000株取4份；5001株以上每增加5000株增取1份，不足5000株的余量计取1份样品；每份样品5株。6.3现场检查首种子取样时注意检聋种子中有无可疑带病种子、首藉残体；植株取样时注意检查有无可疑病株。若有可疑病株应将其挑出来,并送实验室做进一步检验鉴定。7制样按6.1的要求抽取的每份样品应充分混匀，制成平均样品，从每份平均样品中取25g作为检验样品。2 SN/T 1145—20028实验室检验8.1种子检验8.1.1吸水纸培养8.1. 1.1吸水纸培养皿的准备用0.2%的2,4-D钠盐溶液浸渍无菌吸水纸，然后将吸水纸（滤纸）铺在直径为9cm的已灭菌的培养皿底部，每Ⅲ铺3层。样品种子的放置将抽取的检验样品不经表面消毒直接放暨于培养中，每皿均匀放置25粒种子。8. 1. 1.3培养将培养皿置于21℃～23℃条件下培养，每叠夜用熙光灯照明12h，培养10d。镜检10d后取出培养Ⅲ