SN_T 1961.18-2013出口食品过敏原成分检测 第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.18---2013出口食品过敏原成分检测第 18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分Detection of allergen components in food for export-Part 18 :Real timePCR method for detecting buckwheat components2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.18—2013前創言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：-第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分;第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；一第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；一第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；一第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；-第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；一第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；-第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；-第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；-第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第18部分。本部分按照GB/T1.12009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、刘金华、陈颖、高琴、刘月明、李妮、张佳谊、徐宝梁。1 SN/T 1961.18—2013出口食品过敏原成分检测第 18部分：实时荧光 PCR方法检测荞麦成分 范围1SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原荞麦成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原荞麦成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.O1%质量分数）2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态态反应的抗康。3. 2荞荠麦buckwheatnacesa）荞麦属（F别名乌麦、花麦、三角麦，属蓼科（Rolygoiagopyrum)，学名 Fagopyrum esculen-tum.3.3实时荧光 PCR real time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。X方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用养麦ITS和5.8SrRNA核苷酸特异片段检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原荞麦成分。1 SN/T 1961.18--20135 试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物（对)序列和探针：荞麦成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1 试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA荞麦5端引物CGCCAAGGACCACGAACAGAAG荞麦3端引物CGTTGCCGAGAGTCGTTCTGTTTITS 和 5.8SrRNA荞麦探针FAM-CGGGACGCGCTTC-MGB5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/I CTAB,1 400 mmol/I. NaCI,20 mmol/L EDTA,100 mmol/1, Tris.用10%盐酸调pH至8.0,121℃,高压灭菌20min,备用。5.