SC_T 7016.12-2012鱼类细胞系 第12部分：鲤白血球细胞系(CLC).pdf

ICS 65.150B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.12—2012鱼类细胞系第12部分:鲤白血球细胞系(CLC)Fish cell lines-Part 12 : Carp leucocytes cell line (CLC)2012-12-07 发布2013-03-01实施O中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 12--2012前言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头肌肉细胞系(FHM);第2 部分:草鱼肾细胞系(CIK);第 3部分:草鱼卵巢细胞系(CO);第 4部分：虹鳟性腺细胞系(RTG-2);-第5部分:鲤上皮瘤细胞系(EPC);一第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);-第7部分:棕细胞系(BB);第8部分：斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系（BF-2);-第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG);-第11部分：虹鳟肝细胞系（R1)；-第12部分：鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第12部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、高隆英、张利峰、王姝、钱冬、陈艳。 SC/T 7016. 12-—2012鱼类细胞系第 12 部分:鲤白血球细胞系(CLC)1范围本部分描述了鲤白血球细胞系(carp leucocytes cell line,CLC)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于鲤白血球细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1鲤白血球细胞 carp leucocytes cell line,CLCFaisal 和 Ahnc 1990 年将鲤(Cyprinus carpio)的白血球细胞经培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性4.1 形态为上皮样细胞(参见附录 A)。4.2大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约13.32μm，其中最大量细胞的峰值直径约10. 58 um(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CLC对从患病大鲩中分离到的虹彩病毒一大鲩虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus，ADIV）、从德国养殖草鱼中分离到的一种杆形RNA病毒一33/86 敏感，并能导致细胞出现合胞体。接种后的CPE或合胞体形态参见附录A。CLC在接种了鲤春病毒血症病毒(Spring viracmia of carp virus,SVCV)、草鱼i血病病毒(Grasscarp reovirus，GCRV)、病毒性出血性败血症病毒(Viral haemorrhagic septicacmia virus,VHSV)、传染性胰脏坏死病毒(Infcctious pacrcatic nccrosis virus，IPNV)等病毒后，可以出现 CPE,但滴度不高。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合GB/T 6682中级水的规定。5.2细胞培养液1 SC/T 7016. 12—2012主要成分见C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。5.4血清胎牛血清。5.5仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；-倒置显微镜；-血球计数板或电子细胞计数仪；-细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内，在15℃～28℃下培养,其最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层CIC的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液，一般在50mL细胞培养瓶中加人5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2mL，加人的消化液必须完全漫没细胞层。贴壁长满的 CIC消化时间一般为 2min～3.5 min,细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液,轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后，在50ml细胞培养瓶中,加人10mL～15mlL细胞培养