WS_T 355-2011血清甘油三酯的酶法测定.pdf

ICS 11. 020C 50wS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 355—2011血清甘油三酯的酶法测定Guidelines for enzymatic measurements of serum triglycerides2011-12-14 发布2012-06-01实施中华人民共和国卫生部发布 WS/T 355—2011目次前言1范围2术语和定义3方法概述4分析系统5样品采集和处理6测定步骤7测定质量的监测和保持8结果报告附录A（资料性附录)我国人血清甘油三酯水平高低划分方案附录B(资料性附录)血清甘油三酯测定的参考系统参考文献· WS/T 355—2011前言本标准按照GB/T 1.1一2009 给出的规则起草。本标准参考中华医学会检验学会《血脂测定推荐方法》、中华医学会检验分会血脂专家委员会《关于临床血脂测定的建议》制定。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位：卫生部北京老年医学研究所。本标准起草人：王抒、董军、陈文祥。Ⅲ WS/T 355--2011血清甘油三酯的酶法测定1范围本标准规定了血清甘油三酯酶法测定及其质量保证的基本原则。本标准适用于临床实验室和流行病学及营养调查中的血清甘油三酯测定。生产厂商制备甘油三酯酶法测定试剂盒也可参照使用。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1分析系统 analytical system对某检验项目在规定浓度范围内，给出分析结果的一组按规定条件使用的仪器和装置，包括试剂和物品。[改自 ISO/IEC导则 99:2007,3.2 测量系统 measuring system]注1：对于临床生物化学检验，分析系统主要由按规定条件使用的仪器、试剂和校准物组成。注2：其他标准（如GB/T22576一2008)中的类似概念为检验程序”,但检验程序包括更广泛内容，对于本标准，分析系统相当于检验程序的分析部分。2.2验证 verification提供客观证据，考虑任何测量不确定度，说明给定事物满足规定要求。[ISO/IEC 导则 99:2007,2.44]注1：本标准主要是指分析系统的验证，即某分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能指标一致。注2：有关概念是“确认”(validation),即“规定要求”满足指定用途的验证,本标准的验证包含确认的含义。2.3甘油三酯 triglyceride甘油三酯是指甘油的兰脂肪酸酯，形成甘油三酯的脂肪酸有多种，因此甘油三酯是一一组化合物，而不是分子组成和结构固定的单一化合物。此外，血中还存在少量甘油二酯、甘油一酯和游离甘油（正常情况下甘油二酯和甘油一酯之和不足甘油三酯的 3%,游离甘油约 0.11 mmol/L)。甘油三酯重量多以三油酸甘油酯(相对分子质量885.5)计。3方法概述3.1总甘油测定目前,临床实验室普遍采用酶法测定血清甘油三酯。首先，用脂肪酶水解甘油三酯为甘油和脂肪酸,然后，以多种方法测定其中的甘油部分。通常先用甘油激酶和三磷酸腺苷（ATP)将甘油磷酸化，生成磷酸甘油或二磷酸腺苷(ADP),用氧化酶或脱氢酶检测磷酸甘油，也有用丙酮酸激酶检测 ADP。多数情况下測定的结果是总甘油，即包括甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯和游离甘油之和。1 WS/T 355—20113.2去除游离甘油的方法需要除去游离甘油时，常用以下两种方法：a）外游离甘油空白法：分别用含脂肪酶和不含脂肪酶的试剂分析样品，以测定样品的总甘油和游离甘油，自总甘油中减去游离甘油得甘油三酯；b)[内游离甘油空白法，有两种基本模式：1）将试剂中的脂肪酶与其他试剂成分分开,样品先与不含脂肪酶的试剂混合，温育后测定吸光度，加人脂肪酶并温育后再测定吸光度，用两吸光度之差计算甘油三酯浓度，多见于使用NAD/NADH氧还反应的方法；2）1仅限于使用 Trinder 反应的方法,第一步试剂除不含脂肪酶外，也不含 4-氨基安替比林，将样品与第一试剂混合并温育一定时间后，加入含脂肪酶和 4-氨基安替比林的第二试剂温育后测定，由于第一步反应系统中不含脂肪酶及4-氨基安替比林,游离甘油产生的过氧化氢在过氧化物酶的作用下与另一色原（酚类化合物）反应产生无色物质，因此在加入第二试剂之前不需测定吸光度；第二步反应中的脂肪酶可有效消除乳糜样品的混浊，且Trinder 反应产物的最大吸收波长多在 500 nm以上，可只做试剂空白，样品混浊对测定结果影响较小。内游离甘油空白法不增加样品和试剂用量，但试剂需分两步加人，也不能获得样品的游离甘油含量。4分析系统4.1 酶试剂选用的血清甘油三酯酶法测定试剂盒中的酶试剂应能符合以下质量要求：能水解99%以上的血清甘油三酯；1特异性高,干扰因素少；在37℃与血清反应达终点所需时间小于5min,终点时吸光度至少能稳定60min;在血清甘油