SNT 2154-2008进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法 兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2154—2008进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术Determination of coagulase-positive staphylococciin import and export food---Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium2009-03-16实施2008-09-04发布中华人民共和国发布0表变源门国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2154--2008前言本标准中直接平板计数法参照了ISO6888-2《食品和动物饲料中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法‧第 2部分：兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术》［Microbiology of food and animal feedingstuffs--Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci ( staphylococcusaureus and species)一Part 2:Technique using rabbit plasma fibrinogen agar medium],MPN 法参照了ISO6888-3《食品和动物饲料中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法第3部分：MPN检测技术》［Microbiology of food :and animal feeding stuffs--Horizontal method for the enumeration of coagulase-posi-tive staphylococci (staphylococcus aureus and species)—Part 3:Detection and MPN technique for lownumbers]。本标准的附录 A和附录 B均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山西出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵贵明、刘沛、李卫华。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2154—2008进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术范围1本标准规定了进出口食品中凝固酶阳性葡萄球菌的检测方法本标准中直接平板计数法适用于食品中凝固酶阳性葡萄球菌的计数,MPN 法适用于凝固酶阳性葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品。动物饲料等其他食品可参照执行。2设备和材料灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅和干热灭菌箱。2.12. 2水浴箱：48℃±1℃。2.3培养箱：36℃±1℃。2.4吸管:1 mL和10 mL,分刻度分别为0.01 mL和0.1 mL。2.5接种环:3 mm 直径。2. 6天平：量程2kg，灵敏度0.1g。灭菌样品处理器具：取样勺，剪刀，开罐器等2.72.8样品稀释瓶：250mL、500ml无菌培养Ⅲ：直径90mm。2.92. 10）均质器。2. 11无菌试管。2. 12酒精灯或煤气灯。2. 13pH计。金黄色葡萄球菌（凝固酶阳性)标准质控菌株：ATCC27217或其他来源的经验证合格的菌株。2.143培养基和试剂3.1兔血浆纤维蛋白原(RPF)琼脂培养基(见附录;A第 A!1 章)。3.2-改良 GC 肉汤(modified Giolitti.and Cantoni broth,见附录 A第 A.2 章)。3.3 水琼脂(见附录 A第 A.3章）。3.4蛋白陈氯化钠溶液（见附录A第A.4章）。第一法　直接平板计数法检验程序4 检验程序见图 1。 SN/T 2154—2008检样25 g(mL)样品+225 mL蛋白陈氯化钠溶液,均质10倍系列稀释选择3个连续的适宜浓度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养Ⅲ内每皿中加入15 mL ～20 mlRPF琼脂培养基,混匀36℃±1℃24 h ~ 48 h计数各平板菌落数报告图1凝固酶阳性葡萄球菌直接平板计数法检验程序5操作步骤5.1样品的制备5.1.1样品的整个制备过程均应遵循无菌操作程序。5.1.2冷冻样品检验前可在0℃～4℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45℃的条件解冻，时间不超过 15 min。5.1.3液体样品应先将其充分摇匀。5.2样品匀液的制备5.2.1固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，于盛有225mL蛋白陈氯化钠溶液的无菌均质杯内，于8 000 r/min～10 000 r/min 均质1min～2min，制成1：10样品匀液;或于装有 225 mL蛋白陈氯化钠溶液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1：10的