SN_T 4808-2017进出口食用动物、饲料中磺胺类药物的测定 酶联免疫吸附法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4808—2017进出口食用动物、饲料中磺胺类药物的测定酶联免疫吸附法Detection of sulfonamide residues in live animals and feeds for import andexport-Enzyme linked immunosorbent assay method2017-07-21 发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局，刮涤层查真伪 SN/T 4808—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：闫超杰、姚佳、张旭东、苏明明、肖姗姗、孙剑、丁艳、刘芳伊。- SN/T 4808--2017进出口食用动物、饲料中磺胺类药物的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了进出口食用动物的血清、尿液及饲料中九种磺胺类药物残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于禽类和畜类血清、畜类尿液及饲料中磺胺甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪9种磺胺类药物总量的测定。本标准仅适用于出人境检验检疫工作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理与提要采用竞争性酶联反应原理，微孔板上包被着抗磺胺类药物抗体的捕获抗体。磺胺类药物标准品或者样品溶液、HRP标记的磺胺类药物和抗磺胺类药物抗体添加到孔中。游离的磺胺类药物和HRP标记的磺胺类药物竞争结合磺胺类药物抗体，同时板上包被捕获抗体被抑制。没有结合的HRP标记的磺胺类药物在洗板步骤中被洗去。TMB底物加人板孔中，底物的颜色显色强度与样品中磺胺类药物的含量成反比。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，或为更高级别。水为GB/T6682规定的二级水。4.1磺胺类药物多残留快速检测试剂盒1，试剂盒应在4℃～8℃条件下避光保存。4.1.196孔酶标板（可拆式）。4.1.2HRP偶联磺胺类药物。4.1.3抗体工作液。4.1.4TMB底物溶液。4.1.5反应终止液。10×样品提取液F：使用时按1：9的比例用蒸馏水稀释成1×样品提取液F。4.1.620×浓缩洗液：使用时按1：19的比例用蒸馏水稀释成1×工作洗液。4.1.73组织提取液：将浓缩组织提取液加人180 mL蒸馏水，混匀完全溶解后即为组织提取液。.9组织纯化试剂。给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，需经实1)验评估使用这些等效产品。1 SN/T 4808—20174.2甲醇。4.3 乙腈。4.4磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H²O)。4.5磷酸二氢钾(KH,PO4）。4.6氯化钠。4.7氯化钾。4.8标准品：包括磺胺甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪九种标准品，纯度≥99%。参见附录A。4.9标准品储备溶液：将磺胺药物标准品配制成10mg/L甲醇储备溶液，一20℃保存，有效期6个月。4.10 0.01 mol/L 磷酸盐(PBS)缓冲溶液(pH=7.4):称取 8.0 g NaCl,0.2 g KCl,0.24 g KHzPO4 和3.63g NazHPO4，溶于800 mL蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至 7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。冰箱4℃保存。5仪器和设备5.1粉碎机。5.2均质器。5.3天平（精确到0.001g）。5.4漩涡混合器。5.5离心机(3 000×g 以上)。5.6水浴氮吹仪。5.7酶标仪：测定波长450nm。5.8洗板机。5.9单道微量加样器：20 μl.,100 μL,200μL，1000 μL。5.10多通道微量加样器：200μL。6测定步骤6.1试样制备和保存6.1.1试样制备分别取食用活动物的血液100mL、新鲜尿液样品约500g或500mL，均质饲料样品500g，充分混匀，将样品分成两等份，装人洁净容器内，作为试样密封并标明标记。血液样本在保存前应制备成血.清，全血样本置于室温放置2h或4℃过夜后大于3000r/min离心10min，取上清液即为血清。6.1.2试样保存将试样于一18℃以下冷冻保存，在制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2提取6.2.1饲料称取1.0g（精