NYT 1205-2006大豆水溶性蛋白含量的测定.pdf

ICS 67.050B 20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T豆水溶性蛋白含量的测定Method for determination of water solubale protein in soybean2006-12-06 发布2007-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1205—2006前言言本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心本标准主要起草人：张文、李培武、丁小霞、姜俊、甘冬生、谢立华。I NY/T 1205—2006大豆水溶性蛋白含量的测定1范围本标准规定了大豆中水溶性蛋白含量的测定方法。本标准适用于大豆中水溶性蛋白含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后的所有修改单(不包括勘误的内容)或修定版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法3方法原理用水提取大豆中的水溶性蛋白，硫酸使含氮物转化成为硫酸铵,加强碱蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,用标准盐酸滴定计算含氮量,乘以换算系数计算出大豆中水溶性蛋白的含量。4 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。4.1 硫酸(HSO4)。4.2 盐酸(HCI)。4.3 20 g/L硼酸溶液:称取 100g硼酸(HsBO4)溶于 5 000 mL水中。4.4400g/L氢氧化钠溶液：称取2 000g氢氧化钠(NaOH)溶于5000mL水中。4.5 盐酸标准溶液[c(HCI)=0.1 mol/L]:量取 8.3 mL盐酸,溶于1 000 mL水中。标定:精密称取经270℃～300℃干燥恒重过的基准碳酸钠约0.15g,加水 50mL溶解,加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂10 滴,用本液滴定到溶液由绿色变为紫红色。煮沸 2 min,冷却至室温,继续滴定到溶液由绿色变为暗紫色，同时做空白试验。盐酸标准溶液的浓度按式(1)计算：A(1)c= (V1- V2)×0.053 0式中:-无水碳酸钠的质量，单位为克(g)；mVi—盐酸溶液用量,单位为毫升(mL);V2——空白试验盐酸溶液用量,单位为毫升(mL);0.053 0——Na2CO3 的毫克当量。4.6混合指示剂。1.0g/L甲基红乙醇溶液:称取0.1g甲基红溶于100mL乙醇中;5.0g/L溴甲酚绿乙醇溶液:称取0.5g溴甲酚绿溶于100mL乙醇中;两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为3个月。4.7 混合催化剂［(CuSO4+K2SO4）=10+100]:称取10 g硫酸铜(CuSO4·5HzO)和 100 g硫酸钾I NY/T 1205—2006(KzSO4),混匀,研磨,过如.42 mm筛。5仪器设备5.1采用凯氏定氮法为原理的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪，或常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式凯氏蒸馏装置。5.2分析天平,感量0.001g。5.3粉碎机。5.4可控温往复式摇床，频率150次/min，全振幅60mm，（20±2)℃温度可控。5.5 消煮炉。5.6离心机。5.7快速滤纸。6操作步骤6.1 扦样按GB5491扦取大豆样品。6.2试样制备粉碎机粉碎样品,过.25mm筛。6.3提取6.3.1称取粉碎试样5g,精确至0.01g,于 50mL离心管中。6.3.2吸取50mL20℃蒸馏水于离心管中，振摇使试样不结块,均匀分散。6.3.3将离心管固定于摇床,温度控制在(20±2)℃,振荡60minc6.3.4取下离心管,以2000 r/min离心10 mino6.3.5取出离心管,将上清液倒人250mL容量瓶中。6.3.6向离心管残渣中重新加人50mL20℃蒸馏水，同前再振荡60min,离心10min,将上清液倒人6.3.5容量瓶中。6.3.7重复6.3.6操作2次，将提取液全部收集倒入6.3.5容量瓶中，加蒸馏水定容至250mL6.4　消化6.4.1将容量瓶中溶液混合均匀后，快速滤纸过滤至250mL锥形瓶中,弃去最初的10mL～15mL滤液。准确吸取 10mL提取液于500mL蒸馏管中,加人2g～3g混合催化剂、10mL硫酸,充分混匀。6.4.2将蒸馏管置于通风橱中加热消化。开始用100℃低温加热0.5h,至黑泡沫消失，控制瓶中泡沫不超过瓶管的2/3，然后再升温至400℃～430℃，加热1.5h，至消化液呈透明的蓝绿色时，继续加热0.5ho6.5蒸馏、滴定待消化液冷至室温，上机蒸馏、滴定；或采用常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式凯氏蒸馏装置蒸馏、滴定。6.6仪器参考条件设定硼酸吸收滴定模式,加20mL水、70m